PDF《持久性化学发光底物》

但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免.戴手套可以 避免在膜上留下手印,保持膜的干净. 3)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系.曝光不足则条带模糊. 4)发光工作液孵育约 3-5 分钟后膜上的条带发光.强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可 见但可使 X 光胶片曝光.不能简单以肉眼观察判断条带发光时间.肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片 感光,因此弱带可曝光 1-10 小时.如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用 ECL 发光 和曝光. 5)由于发光液灵敏度高,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗(储液浓度 1mg/ml)稀释倍数:1:1000-1:50000;

二抗 (储液浓度 1mg/ml)稀释倍数:1:50,000-1:250,000.抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败. 6)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜. 7)避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景. 8)使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小. 9)使用生物素-亲和素系统,避免使用牛奶封闭,可能会导致背景过高. 10)金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子. 11)叠氮化钠(NaN3)能抑制 HRP 活性,若回收 HRP 标记探针或者抗体应避免使用 NaN3. 12)本品无特殊毒性,按普通化学品处理. 上海翊圣生物科技有限公司 客服热线:400-6111-883 E-mail: [email protected]

网址: www.yeasen.com 本产品仅作科研用途! 附 常见问题及解答 胶片成像相反 (如白色条带, 黑色背景) 检测体系 HRP 过量 进一步稀释 HRP 偶联试剂. 膜上呈现棕色或黄色条带 避光条件下膜上具有发光斑点 信号持续时间少于 24h 信号较弱 检测体系 HRP 过量导致消耗更 多底物,导致信号减弱 进一步稀释 HRP 偶联试剂. 抗原抗体量较少 增大抗体和抗原的使用量. 转膜效果不佳 优化转膜条件,提高转膜效率. HRP 酶活力或底物活力下降 于暗室中准备 1-2ml 本品制备的发光液,关灯 后,加入 1?l 待检测 HRP 标记物,该混合液会 立即产生蓝色的光,且在后继几分钟内消退.如 果没有,请检测另

1 支HRP 标记物进行进一步 检测. 背景较高 检测体系 HRP 过量 进一步稀释 HRP 偶联试剂. 封闭不充分 优化封闭条件. 封闭剂不合适 换用合适的封闭剂. 清洗不充分 增加清洗此时,延长清洗时间. 胶片曝光过度 降低曝光时间. 抗原或抗体浓度较高 降低抗原抗体使用量. 抗体质量差 换用高质量抗体. 蛋白条带内有斑点 转膜不充分 优化转膜条件. 膜水化不充分 按照厂家说明书优化膜的水化条件. 膜和胶片间存在气泡 赶走气泡. 曝光胶片上呈现斑点背景 HRP 标记物形成聚合物 用0.2um 滤膜过滤 HRP 标记物. 非特异性条带 检测体系 HRP 过量 进一步稀释 HRP 偶联试剂. SDS 造成非特异性结合 转膜后洗膜,去除 SDS. 抗体质量差 换用高质量抗体. 封闭不充分 延长封闭时间或换用合适封闭剂. 相关产品 36222ES60 Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit 增强型 ECL 化学发光检测试剂盒 100ml 36222ES76 Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit 增强型 ECL 化学发光检测试剂盒 500ml 36222ES80 Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit 增强型 ECL 化学发光检测试剂盒 1000ml 36208ES60 Super ECL Detection Reagent ECL 化学发光超敏显色试剂盒 100ml 36208ES76 Super ECL Detection Reagent ECL 化学发光超敏显色试剂盒 500ml 36208ES80 Super ECL Detection Reagent ECL 化学发光超敏显色试剂盒 1000ml 36223ES60 SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate 持久性化学发光底物 100ml 36223ES70 SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate 持久性化学发光底物 200ml 36223ES76 SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate 持久性化学发光底物 500ml 36224ES60 SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate 最高灵敏度化学发光底物 100ml 36224ES70 SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate 最高灵敏度化学发光底物 200ml 36224ES76 SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate 最高灵敏度化学发光底物 500ml