PDF《20152016 年河北省腹泻散发病例中诺如病毒》

acute diarrhea;

epidemiology

1 引言诺如病毒(norovirus, NV)属于人类杯状病毒, 诺如病 毒存在多种传播途径, 感染剂量低, 且变异速度快, 各年 龄段人群均易被感染, 常在医院、学校、军队等人群密集 单位暴发和流行.在全球范围, 诺如病毒是引起人类非细 菌性急性胃肠炎的最主要的病因, 引起广泛关注和研究 [1] . 国内

27 省市 2009~2013 年门诊腹泻病例诺如病毒监测 资料显示, 在6~23 月龄儿童和

45 岁以上人群的检出率最 高, 分别为 13.7%和12.4%, 秋、冬季检出率较高, 主要型 别为 GⅡ型[2] . 国内有关诺如病毒的研究主要集中在免疫力 低下的婴幼儿、老年人以及集中暴发的感染人群, 对全年 龄段散发诺如病毒腹泻的报道较少.本研究对河北省

6 个 地市医院肠道门诊

2015 年9月~2016 年12 月就诊的全年 龄段散发腹泻患者粪便样本进行了诺如病毒检测, 并对其 主要流行病学资料进行了分析, 以了解河北省腹泻散发病 例中诺如病毒感染的主要特征及趋势, 为预防及控制该病 毒引起的疾病提供科学依据.

2 材料与方法 2.1 标本采集及数量 按河北省的地域划分, 选择

6 个地区(石家庄、邢台、 沧州、秦皇岛、承德和廊坊), 每个地区随机选择

2 个三甲 级医院肠道门诊进行腹泻便标本采集, 标本符合病例定义 (24 h 内腹泻次数

3 次或以上、且大便性状有改变).时间 从2015 年9月至

2016 年12 月, 共采集腹泻便样本1240 份. 2.2 仪器和试剂 CFX96 荧光定量 PCR 仪(美国 Bio-Rad 公司);

天隆核 酸自动提取仪、病毒 RNA/DNA 提取试剂盒(磁珠法)(西安 天隆科技公司);

蛋白酶 K(美国 Sigma 公司);

RNA Ul trasense One-step Quantitative RT-PCR System(美国 Life Technologies 公司);

引物和探针序列参照 ISO/TS15216-2 《食品中甲肝病毒和诺如病毒 real-time RT-PCR 检测方法》 [3] , 由华大基因公司合成;

阳性对照采用已知诺如病毒阳 性样品. 2.3 实验方法 2.3.1 样本处理 水样便或粘液便经

1 mL 磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline, PBS)混悬后取

1 mL,

8000 r/min 离心

5 min, 取上清作为粗提样本.然后, 按核酸提取试剂盒说明进行 核酸提取, 样本体积为

200 μL, 提取后得到总核酸体积为

60 μL, 提取后的 RNA 于?80 ℃保存. 2.3.2 实验室检测 诺如病毒核酸检测应用一步法荧光定量(RT-PCR), 分别检测 GI 型和 GⅡ型, 按试剂盒说明配制反应体系, 扩 增条件为

55 ℃

30 min;

95 ℃

15 min;

95 ℃

15 s,

60 ℃

20 s,

65 ℃

30 s(检测荧光),

45 个循环.结果判定 Ct 值≤36 时, 判断结果为阳性. 2.4 统计学分析 用Excel 软件进行数据统计, 计数资料采用卡方检验, P