PDF《黄亚东,郑 青 ,王 林川2,李校垄料,黄 自然 3》

1 . X DNA/ / - / / n d I I I ;

2 . P C R/ p GE M GD S

5 ;

3 . p GE MGDS S / B a r nH I ;

4 , p GE M GD S

5 / E c o RI .

2 .

4 I B V GD0 5株s1基因 的全 序列分析 用M13通 用引物在ABI P RI S M M3

7 7自动测序仪上进行序列分析,测序结果与标准毒株M4 1同区段序列作同源性比较 分析,结果表明,IBVGD

0 5 株S1基因从起始密码ATG 到 s前 体蛋白裂解位点总长为1.61lkb的 全序列,与 已发表的标准株M4 1同 区段 序列相比较 , 仅有47个 碱基差异,同源性达到

9 7 .

1 4%.从碱基变 化来 , 在47个碱 基差 异中, 有25个碱基是 T与 C之 间互换 , 并 且变异 区段 集中在5端.2.5IBVGD

0 5株S1基因 表达载体 的构建 将质粒pGE MGD S 5经EcoRI酶切,低融点回收1.65kb的 S1基因片段,与EcoRI酶切消化并用CI A P 处理过的表达载体质粒pET2

1 d进行连接,连接产物转化受体菌E. c o l i J M

1 0

9 , 挑取单菌落小量提取质粒,经酶切分析和PCR扩增鉴定,获维普资讯 http://www.cqvip.com

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8 中国病毒学第17卷 妻誓一组表达载体pET-的3讨 论3鉴定结果分别如图所示. J ¨ 图3重组表达载悼pET―S 1的酶切鉴定电泳图谱Fi g.

3 Re s t r ic t i o n e n z y m e Di g e s t i o n o f Re c o m b i n a n t e xp r e s s i o n v e c t o r p ET ― S1 L a n e l , ........