PDF《o E6细 胞诱导细胞 凋亡》

4 8 h后的细胞 染色体DN A中小片段 DN A量更多, 更明显. 与DN A 标准 比较, 这些 DNA片段大小为

2 0

0 b p左右及其整 数倍 .而未感染病毒的细胞染色体 D NA 完整无损 ( 图1).由此我们初步断定 S AR S ― C o V感染 V e r o E

6 细胞过程中,细胞可能经过凋亡过程而死亡. b p

1 5

4 3

9 9

4 6

9 7

5 1

5 3

7 7

2 3

7 图1SAR S ― C o V感染的 V e r o E 6细胞 DN A琼脂糖凝胶 电泳 F i g .

1 DNA a g a r o s e g e l e l e c t r o p h o r e s i s o f S ARS - Co V i n f e c t e d Ve r oE6 c e l

1 .

1 , DNA ma r k e r ;

2 , n o r ma l V e r o E

6 c e l l s ;

3 ,DNA f r a g me n t a t i o n ( DNA l a d d e r ) wa s o b s e r v e d i n S ARS ― Co V i n f e c t e d V e r o E6 c e l ls .

2 .

2 S AR S ― C o V感染 V e r o E 6细胞的形态特征 为了证实 S AR S ― C o V感染 V e r o E 6细胞与凋亡 发生的直接关系,我们进一步对病毒感染的细胞用 问接免疫荧光染色和 H o e c h s t

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2 5 8染色观察.观 察发现 , 表现早期感染的细胞 ( 呈现较弱免疫荧光 ) 的细胞核形态正常 ,细胞本身也不表现明显的细胞 病变( C P E ) .而表现深度感染 的细胞 ( 呈现较强免 疫荧光 )的细胞核形态大多出现染色质凝集 ,细胞 核 固缩 ,甚至 核碎裂 ,形 成凋亡 小体 ( a p o p t o t i c b o d i e s ) .这些细胞均表现 明显的细胞病变( C P E ) . 反之 ,呈现染色质凝集、细胞核固缩 、具有凋亡小 体的细胞均为表现明显细胞病变被感染的细胞 ( 图2).图2A显示细胞病变( C P E ) , 可见细胞变形凸起 , 细胞中出现 颗粒 状 结构 .图2B显示了利 用含 S AR S ― C o V特异抗体的 S A RS恢复病人血清进行的 间接免疫荧光染色 ,具有明确的免疫荧光反应 ,并 与细胞病变呈对应关系.图2C是 Ho e c h s t

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2 5 8染 色照片,可见部分细胞核发生 了固缩,有的甚至 已 经开始形成凋亡小体 ,这些细胞均为表现细胞病变 被感染的细胞 . 恢 复病 人的血清 中含有 可与病毒表面抗 原结 合的特异抗体, 通过带荧光标记 的羊抗人 I g G结合, 从而可以检测病毒感染的细胞I

4 J .细胞凋亡的形态 改变 首先是细胞缩小,胞质凝缩 ,内质网疏松并和 胞膜融合,染色质逐渐凝集成新月状,附在核膜周 边, 嗜碱性增强, 此后细胞核固缩成均一的致密物, 进而核碎裂 ,而胞膜完整 .继之核膜 出芽 ,固缩染 色质脱落,形成膜包凋亡小体 .用Ho e c h s t

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8 染色,可 以检测细胞核的结构形态变化,观察病毒 维普资讯 http://www.cqvip.com 鄢然 ,等.S A RS ― C o V感染 V e r o E 6细胞诱 导细胞 凋亡

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3 感染 的细胞的细胞核形态特征的变化.我们同时通 过细胞病变 、间接免疫荧光染色和 Ho e c h s t

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8 染色的测定观察 ,发现具有细胞凋亡特征的所有细 胞均 为处于感染晚期 的细胞 .表现 明显细胞病变 ( C P E)的细胞大多 已经 出现核质凝缩或形成凋亡 小体进入细胞凋亡的过程.因此 ,可以推断sAR s . C o V感染 V e r o E 6细胞诱发 了细胞凋亡. 图2SAR S C o V 感染的 V e r oE 6细胞 的细胞病变 、感染 、 以及细胞核形态 的同步观察 F i g .

2 S ARS Co V i n f e c t e d V e r o E6 c e l l s we r e o b s e r v e d s i m― u l t a n e o u s l y f o r CP E, i n f e c t i o n a n d n u c l e i mo r p h o l o g y a f t e r i n f e c t i o n . A,S ARS Co V i n d u c e d CP E i n Ve t o E6 c e l l s .B,I ~ t e d Ve r o c e l l s a r e s h o wn b y i n d i r e c t f lu o r e s c e n c e a n t i b o d y a s s a y wi t h t h e s e r u m o f a c o n v a l e s c e n t p a t i e n t . C, S ARS Co V i n d u c e d a p o p t o s i s i n Ve r o E6 c e l l s b y o b s e r v a t i o n o f n u c l e i wi t h c o n d e n s e d c h r omo s o me .