PDF《基于 26S rD NA D1Π》

47 卷2期2007 年4月4日微生物学报Acta Microbiologica Sinica 47(2) :359~362

4 April

2007 基金项目 :国家自然科技资源基础条件平台项目(2005DK A21204)

3 通讯作者.

Tel :86210264666552 ;

E2mail :cheng100027 @163. com 作者简介 : 马凯(1979 - ) ,男 ,陕西镇安人 ,博士 ,主要从事微生物资源及系统发育学研究.E2mail : ubimakai @yahoo. com. cn 收稿日期 :

2006208222 ;

接受日期 :

2006209222 ;

修回日期 :

2006212212 基于 26S rDNA D1Π D2 区序列分析的

15 株白地霉 分子分类学研究 马凯,刘光全 ,李金霞 ,姚粟,程 池3(中国食品发酵工业研究院 中国工业微生物菌种保藏管理中心 北京 100027) 摘要:采用 26S rRNA 基因 D1Π D2 区系统发育分析的方法对 CICC(中国工业微生物菌种保藏管理中心) 保藏的

15 株白地霉( Geotrichum candidum) 菌种进行复核鉴定.系统发育分析结果表明

15 株白地霉属于地霉属的成员 ,且形 成两个系统发育分支 ,系统发育上最接近 Galactomyces geotrichum NRRL Y

217569 T ,与其同源性为

9613 %~9813 %.15 株白地霉 26S rRNA 基因 D1Π D2 区序列显著不同于地霉属的模式种及其它种 ,可能代表地霉属的两个新种 ,但这一 结论尚需进一步的实验去证实. 关键词 : 白地霉 ;

分类 ;

系统学 ;

26S rRNA 基因 ;

D1Π D2 区 中图分类号 :Q939 文献标识码 :A 文章编号 :000126209(2007)

0220359204 白地霉 ( Geotrichum candidum) 是一种形态类似小型丝状 真菌的酵母菌 ,由于其菌落呈白色绒毛状而得名.白地霉具 有分支的菌丝体 ,形成单个或成链的节孢子 ,节孢子呈长筒 形或方形 ,也有椭圆或圆形.其菌体蛋白营养价值很高 ,广 泛用于动物发酵饲料的生产.同时白地霉也可用于白酒生 产和有机废水处理[1 , 2] ,比如我国传统名酒22汾酒的大曲中 就含有相当数量的白地霉.在欧洲白地霉是奶酪加工中重 要的菌株 ,在奶酪的成熟过程中起到重要作用 ,同时给奶酪 提供某些特殊芳香风味 [3 , 4] . 分类学上 ,白地霉属于半子囊菌纲、 酵母目、 假丝酵母 科、 地霉属 [5] ,其有性型名称为 Galactomyces geotrichum .文献 记载有白地霉的同物异名多达几十种 [5] ,比较常见的有 Oospora lactis 和Endomyces geotrichum .虽然对白地霉的研究 开展较早 ,在工业上使用也很广泛 ,但大多数白地霉工业菌 种的鉴定仍依赖于表型特征 ,由于其本身的复杂性和菌株的 多样性 ,运用分子分类方法对工业白地霉菌种准确鉴定分析 十分必要.本研究运用 26S rRNA 基因 D1Π D2 区序列系统发 育分析的方法研究了 CICC 保藏的

15 株白地霉菌株 ,旨在把 分子生物学技术应用于白地霉分类鉴定 ,为中心菌种质量控 制提供依据和支持.

1 材料和方法

111 材料

11111 菌种来源与培养基 : 实验所用菌株共

15 株 ,均为 CICC保藏 ,菌株培养所用培养基为 5° Bé 麦芽汁培养基 [6] . 各菌株相关信息如表

1 所示.

11112 主要试剂和仪器 : Taq 酶、 dNTP、 DNAmarker 购自天为 时代生物有限公司 ;

G oldView 购自北京塞百盛基因技术有限 公司 ;

Tris、 EDTA、 SDS、 醋酸钾购自北京华绿渊生物技术发展 公司.凝胶成像仪(GAS7300 , Uvipro 公司) ;

PCR 扩增仪(MiniCycler T M ,J Research 公司) .

112 菌体培养 将冻干保藏的菌种复活培养后 ,在平板上划线分离 ,培养20h 后挑取单菌落接种到20mL 液体培养基中,30 ℃ 200rΠ min培养 16~20h.