PDF《基于 26S rD NA D1Π》

217569 T 序列相似性分别为

9811 %和9813 % ,也低于 26S rRNA 基因 D1Π D2 区种间相似性

99 %的界限.

3 讨论 早期的白地霉分类鉴定主要依据表型特征和生理生化 实验 ,本中心的菌种档案对这

15 株白地霉有较为详尽的记 录 ,包括 :固体培养特征为菌落直径 30~50mm ,白色绒毛状、 扁平、 均匀、 有放射线 ,菌落中心突起 ;

液体培养宏观特征为 液体表面白色绒毛状 ,不浑浊 ,无沉淀产生 ,无气泡产生 ;

液 体培养显微特征为裂殖的无性生殖方式 ,产节孢子 ,节孢子 长方形、 椭圆形或圆形 ,呈单个或链状排列 ,节孢子大小为 3~1018 μ m * 615~2318 μ m;

假菌丝体有二叉分枝结构 ;

碳源 同化试验结果为同化葡萄糖、 半乳糖、 木糖 ,不同化蔗糖、 麦 芽糖、 乳糖、 纤维二糖、 阿拉伯糖(CICC

1315 同化阿拉伯糖) ;

氮源同化实验结果为同化硫酸铵和盐酸乙铵 ,不同化硝酸 钾.根据这些数据本中心保存的

15 株白地霉符合白地霉的 描述特征 ,在当时的分类手段下这种分类鉴定应该说是准确 的.但随着分子生物学手段尤其是 rRNA 序列测定引入到 分类学中以后对酵母菌的分类学产生了巨大影响 ,如地霉属 的另 两个有性型的种Galactomyces citri2aurantii [12] 和G1 reessii [13] 起初只是依据与 G. geotrichum 很小的表型特征差 异而区分为不同的种 ,后来根据 DNA2DNA 杂交 [14] 、 rRNA 序 列分 析[11] 才找到了更充足的分类依据.Peterson 和Kurtzman [15] (1991) 通过比较部分酵母菌 26S rRNA 基因 D1Π D2 区的同源性和 DNA2DNA 杂交值的相关性 ,根据所分析的酵 母菌菌株数据 ,提出种内该序列差异小于

1 %.Kurtzman 和Robnett [8] (1998) 研究

500 株子囊菌酵母 26S rRNA 基因 D1Π D2 区的系统学后把这一概念扩展到所有的酵母种类中 ,同时依 据26S rRNA 基因 D1Π D2 区序列同源性提出了

55 个酵母的同 物异名.目前 26S rRNA 基因 D1Π D2 区已经成为酵母分类的 主要依据.近年 Pimenta 和Michael 等主要依据 26S rRNA 基因D1Π D2 区同源性差异提出了白地霉无性型的两个新种 , Geotrichum silvicola [16] 和Geotrichum vulgare [17] . 本实验采用 26S rRNA 基因 D1Π D2 区序列分析的方法对 CICC 保藏的

15 株白地霉菌株进行了系统发育学研究 ,结果 显示 这15 株白地霉菌株与白地霉模式株Galactomyces geotrichum NRRL Y

217569 T 的序列相似性较低(9613 % ~

9813 %) [9 ,10] ,其中

13 株菌株和另外

2 株菌株的相似性也较 低(9611 %~9613 %) .推测这

15 株菌株可能代表了地霉属 的两 个新种.但是有必要指出,目前所说的Geotrichum candidum 或Galactomyces geotrichum 实际上是一 个复合种,Smith (1995) 根据 DNA 杂交提出 Galactomyces geotrichum 可能 包含

4 个种 ,除Galactomyces geotrichum sensu stricto 外 ,还包括 Galactomyces geotrichum group A , group B , group C [14] .CICC 保 藏的

15 株 白地霉 有可能属于 Galactomyces geotrichum group A

0 6

3 MA Kai et al.Π Acta Microbiologica Sinica (2007) 47(2) 图115 株CICC 保藏白地霉菌株及相关种 26S rDNA D1Π D2 区的系统发育树 Fig.

1 Phylogenetic tree drawn from neighbor2joining analysis of the 26S rDNA D1Π D2 domain sequences , depicting the relationships of Geotrichum strains from CICC with close relatives in Galactomyces. Numbers in parentheses represent the sequence accession number in GenBank. The number at each branch point is the percentage supported by bootstrap. Bar ,1 % sequence divergence. group B , group C中的一群. 由于我们采取的是 PCR 产物直接测序 ,所以可以排除由 于rRNA 多态性[18] 引起的序列差异干扰种的鉴别的现象. 但是 ,由于这