PDF《中华人民共和国国家标准》

25 μL, 然后在第二块板的样液点上加滴 OA 标准溶液 8μL(浓度 0.5μg/mL).点样时,需边滴加边 用 电吹风吹干,交替使用冷热风. 5.2.3 展开 5.2.3.1 展开剂 横展剂:乙醚或乙醚-甲醇-水(94:5:1). 纵展剂:a.甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(6:3:1.2:0.06)或甲苯-乙酸乙酯-甲酸 (6:3:1.4);

b.苯-冰乙酸(9:1). 5.2.3.2 展开 横向展开:在展开槽内倒入 10mL 横展剂,先将薄层板纵展至离原点 2~3cm,取出通 风 挥发溶剂 1~2min 后,再将该薄层板靠标准点的长边置于同一展开槽内的溶剂中横展,如横 展剂不够,可添加适量,展至板端过 1min,取出通风挥发溶剂 2~3min. 纵向展开:在另一展开槽内倒入 10mL 纵展剂,将经横展后的薄层板纵展至前沿距原 点13~15cm.取出通风挥干至板面无酸味(约5~10min). 5.2.4 观察与评定 将薄层色谱板置 365nm 波长紫外光灯下观察. a.在紫外光灯下将两板相互比较, 若第二块板的样液点在 OA 标准点的相应处出现最 低检出量,而在第一板相同位置上未出现荧光点,则样品中的 OA 含量在本测定方法的最 低 检测量 10μg/kg 以下. b.如果第一板样液点在与第二板样液点相同位置上出现荧光点则看第二板样液的荧 光点是否与滴加的标准荧光点重叠,再进行以下的定量与确证试验. 5.2.5 稀释定量 比较样液中 OA 与标准 OA 点的荧光强度,估计稀释倍数. 薄层板经双向展开后,当阳性样品中 OA 含量高时,OA 的荧光点会被横向拉长,使点变扁,或分成两个黄绿色荧光点.这是因为在横展过程中原点上 OA 的量超过了硅胶的吸 www.grainnet.cn 附 能力,原点上的杂质和残留溶剂在横展中将 OA 点横向拉长了,这时可根据 OA 黄绿色荧 光的 总强度与标准荧光强度比较,估计需减少的滴加微升数或所需稀释倍数.经稀释后测定含 量时,可在样液点的左边基线上滴加二个标准点,OA 的量可为 4ng、8ng,比较样液与两 个 标准 OA 荧光点的荧光强度,概略定量. 5.2.6 确证试验 用碳酸氢钠乙醇溶液(在100mL 水中溶解 6.0g 碳酸氢钠,加20mL 乙醇)喷洒色谱板, 在 室温下干燥,于长波紫外光灯下观察,这时 OA 荧光点应由黄绿色变为蓝色,而且荧光强 度 有所增加,再估计样品中 OA,如果与喷洒前情况不一致,要利用喷洒前所做的估计.

6 计算 样品中赭曲霉毒素 A 的含量可按下式计算. V1

1000 x= A * * D * V2 m 式中 x样品中赭曲霉毒素 A 的含量,μg/kg;

A―薄层板上测得样液点上 OA 的量,μg;

D样液的总稀释倍数;

V1―苯-乙腈混合液的体积,mL;

V2出现最低荧光点时滴加样液的体积,mL;

m―苯-乙腈溶解时相当样品的质量,g.

7 精密度 本方法经五个协作者验证, 在OA 加入量分别为 10,50,100μg/kg 水平、 每个水平 n=2 时,方法的回收率用 X 表示、精密度用 SD 表示: 小麦分别为 93±10.23;

92±14.72;

105±38.85. 玉米分别为 88±9.68;

88±9.68;

103±41.2. [上述数据为(X±SD)%] 附加说明: 本标准由卫生部卫生监督司提出. 本标准由卫生部食品卫生监督检验所、辽宁省食品卫生监督检验所、黑龙江省食品卫 生监督检验所、北京市卫生防疫站、山西省卫生防疫站负责起草. 本标准主要起草人魏润蕴、鲍凤珍、方晓明、杨貌端、高晓岚. www.grainnet.cn 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释. 中华人民共和国卫生部 1991-06-07 批准 1992-03-01 实施 www.grainnet.cn ........