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牛外周血白细胞分离液试剂盒(细胞培养及分子生物学专用)说明书 【产品组成】 为方便广大用户使用,试剂内容如下: 名称 产品编号 规格 A 各种动物外周血白细胞分离液 200ml B 红细胞裂解液(赠品) NH4CL2009 100ml C 全血及组织稀释液(赠品) 2010C1119 200ml D 细胞洗涤液(赠品) 2010X1118 200ml 【预期用途】 适用于从动物抗凝血液中分离白细胞,无菌条件下所分离的白细胞可用于分子生物学及 细胞培养等.

本品仅供科研使用. 【检验原理】 本分离液为 FICOLL、羟乙基淀粉

550 与泛影酸葡甲胺的混合液.抗凝血液可在分离液 中分层. 离心时, 在FICOLL、 羟乙基淀粉的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降;

此时, 白细胞仍处于分离液上层及分离液层, 红细胞污染可通过红细胞裂解液裂解红细胞去除. 大 部分血小板可在细胞清洗低速离心过程中去除. 其他人及动物多种比重细胞分离液,因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞 带电不同,用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称. 【必备但不提供的仪器及耗材】 可提供 400g 离心力的水平转子离心机、15ml 玻璃离心管、吸管等. 【注意事项】 1. 使用前,本分离液需复温至 18-22℃.为获得最佳的实验结果,最好在取血后

2 小时内 进行实验,血液提取后存放时间越长细胞活性越低. 2. 实验过程中,如需稀释血液或洗涤细胞,不可使用含 Ca、Mg 离子的缓冲液及培养液, 其成分会导致血细胞凝集大大降低细胞得率及纯度. 本公司生产的全血及组织稀释液和细胞 洗涤液不含 Ca、Mg 离子、低内毒素水平且含细胞和保护成分,推荐使用. 3. 最优抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素,其他抗凝剂也可使用,但会影响细胞活性.应 注意在血液稀释过程中去除抗凝剂体积. 4. 当血液样本粘度过高或血液样本大于等于 3ml 时,最优稀释方法:将血液于 18-22℃以250g 离心

10 分钟,弃去血浆,补充添加全血及组织稀释液(产品编号:2010C1119) ,添 加量为所弃去血浆体积的 1.5-2 倍,混匀备用.注:不当的稀释方法会降低细胞得率及活 性. 5. 实验操作时,不可使用含粉手套、不可使用内毒素含量过高的液体,手套中的粉末颗粒 及高内毒素会激活细胞从而降低细胞得率及活性.建议使用天津灏洋配套相关产品. 6. 本实验不可使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,其带有的静电作用将导致细胞 贴壁影响分离效果. 7. 吸取过多的白细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细 胞数量增加. 8. 吸取过多的白细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂. 9. 如需进行细胞计数,则需血液贮藏时间不得多于

10 小时,否则将导致细胞被激活,得 率降低. 10. 为去除所混杂的血小板,可在分离液上层加上 4-20%蔗糖梯度等渗溶液进行二次离心. 11. 细胞纯度可在步骤

10 后使用瑞氏染色方法确定,细胞活性可用台盼蓝处理后观察. 12. 如所实验后细胞得率或活性过低,请联系上海研谨生物技术支持以寻求帮助,具体联系 方式 详见 【生产企业】 项目下内容. 【检验方法】 情况 A: 血液样本小于 3ml 时,实验方法如下: 1. 取一支 15ml 离心管,加入 3ml 分离液置于 18-22℃. 2. 将血液样本小心加于分离液之液面上.18-22℃,400g 离心