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2 和步骤

3 一次.通常极微量的红细胞 不 会影响后续的一些检测. f. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验. 注:对于常规步骤,多一步洗涤过程中的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也 更好一些,同时不需要大体积的离心管.快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同 时需要大体积的离心管. C. 对于血液样品: a. 取新鲜抗凝血,400-500g 离心

5 分钟,离心弃上清. b. 加入 6-10 倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解 1-2 分钟.例如细胞沉淀的 体积为 1ml,则加入 6-10ml 的红细胞裂解液.本步骤在室温或

4 度操作均可.注意:对于 鼠的血液,裂解 1-2 分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至 4-5 分钟,并且裂 解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解. c. 400-500g 离心

5 分钟,弃红色上清.4℃离心效果更佳. d. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤

2 和步骤

3 一次.通常极微量的红细胞 不会影响后续的一些检测. e. 洗涤 1-2 次:加入适量 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g 离心2-3 分钟,弃上清.可再重复

1 次,共洗涤 1-2 次.洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀 体积的

5 倍.4℃离心效果更佳. f. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验. 注:对于微量或少量的血液样品,可以在第一步中不进行离心弃上清的操作,直接在第二步 中加入

10 倍血液体积的红细胞裂解液,并在室温或 4℃裂解 4-5 分钟.对于鼠的血液,裂解4-5 分钟已经足够,对于人的外 周血,宜延长裂解时间至

10 分钟,但通常不宜超过

15 分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇 动以促进红细胞裂解.后续步骤相同. D. 对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤: a. 每1ml 新鲜抗凝血中加入 10ml 红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解 4-5 分钟.本步骤在 室温或

4 度操作均可.注意:对于鼠的血液,裂解 4-5 分钟已经足够,对于人的外周血,宜 延长裂解时间至

10 分钟,但通常不宜超过

15 分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促 进红细胞裂解. b. 加入 20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀. c. 400-500g 离心

5 分钟,弃红色上清.4℃离心效果更佳. d. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤

2 和步骤

3 一次.通常极微量的红细胞 不会影响后续的一些检测. e. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验. 注:对于常规步骤,多一步洗涤过程的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更 好一些,同时不需要大体积的离心管.快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时 需要大体积的离心管. 【储存条件及有效期】 18-25℃避光保存,有效期

2 年.启封后置 4℃保存,溶液变浑浊或感染细菌时,产品 失效.本品为真空包装,未启封前置于 10℃ 以下易出现白色结晶,影响分离效果. 【适用仪器】 半径 15cm 水平转子离心机. 【样本要求】 本分离液要求血液为新鲜的抗凝血,血液收集时应无菌操作且在储存、处理和运输过 程中避免冷冻和冷藏. 【参考值(参考范围) 】 本实验白细胞的提取率及纯度均大于 80%. 【检验结果的解释】 由于各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季的差异,可能影响分离效 果,用户可以调节离心转数和离心的时间,摸索最佳的分离条件(具体分离条件各实验室自 定) . 【检验方法的局限性】 本试验要求,在正常大气压下,样本、分离液及分离环境温度为 18-22℃.本分离液在 低温时呈较高密度,在高温时呈较低密度. 【产品性能指标】 pH 7.0-7.5 渗透压 280-340mOsmol/kg 无菌 直接接种培养