PDF《纸片快速法》

2 否,应无杂色斑点,无明显变形,表面平整. (3)纸片加入相应水样,充分浸润、吸收后,将内包装聚丙烯塑膜袋倒置,袋口应无水滴悬挂. (4)纸片以去离子水或蒸馏水充分润湿后,其pH 值应在 7.0~7.4 范围内. (5)纸片和内包装聚丙烯塑膜袋应无菌,加入相应水量的无菌水,37 ℃±1 ℃培养

24 h 后,纸片应无 微生物生长,其紫色保持不变,且无红斑出现. (6)按7.4.2 中的方法进行总大肠菌群和粪大肠菌群阴性、阳性标准菌株检验,其特性应符合要求. 4.2 无菌水 用新制备的去离子水或蒸馏水,按无菌操作要求,121 ℃高压蒸汽灭菌

20 min,备用. 4.3 硫代硫酸钠溶液:ρ(Na2S2O3)=0.10 g/ml 称取硫代硫酸钠

10 g,溶于适量蒸馏水(或去离子水)中,稀释至

100 ml,现配. 4.4 乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液:ρ(C10H14N2O8Na2・2H2O)=0.15 g/ml 称取 EDTA-Na2

15 g,溶于适量蒸馏水(或去离子水)中,稀释至

100 ml,此溶液保质期为

30 d.

5 仪器和设备 5.1 恒温培养箱:37 ℃±1 ℃. 5.2 恒温培养箱:44.5 ℃±0.5 ℃. 5.3 高压蒸汽灭菌器:121 ℃、101.3 kpa. 5.4 冰箱:0~4 ℃. 5.5 移液管:1±0.01 ml、10±0.1 ml. 5.6 试管: ?15 mm*150 mm. 5.7 采样瓶:250 ml. 注1:移液管、试管、采样瓶等玻璃器皿及采样器具试验前要按无菌操作要求包扎,

121 ℃高压蒸汽灭菌

20 min,烘干, 备用.

6 样品 6.1 样品采集 与其他项目一同采样时,先单独采集微生物样品,采样瓶不得用水样洗涤,按无菌操作的要求采集水 样约

200 ml 于灭菌的采样瓶中. 纸片不加水 纸片加水

3 采集江、河、湖、库等地表水样时,可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中,距水面 10~15 cm 处,瓶口朝水流方向,拔玻塞,使水样灌入瓶内然后盖上瓶塞,将采样瓶从水中取出.如果没有水流,可 握住瓶子水平前推.采好水样后,迅速扎上无菌包装纸. 从龙头装置采集样品时,不要选用漏水的龙头,采水前将龙头打开至最大,放水 3~5 min;

然后将龙 头关闭,用火焰灼烧约

3 min 灭菌,开足龙头,再放水

1 min,以充分除去水管中的滞留杂质.采样时控制 水流速度,小心接入瓶内. 采集地表水、废水样品及一定深度的水样时,可使用灭菌过的专用采样装置采样. 在同一采样点进行分层采样时,应自上而下进行,以免不同层次的搅扰. 6.2 样品保存 采样后

2 h 内检测,否则,需10 ℃以下冷藏并不得超过

6 h.实验室接样后,不能立即开展检测的,应 将样品放入 0~4 ℃冰箱并

2 h 内测定. 6.3 干扰和消除 如果采集的是含有余氯或经过加氯处理的水样,需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液(4.3)0.2 ml;

如果采集的是重金属离子含量较高的水样, 则在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠 (EDTA-Na2) 溶液 (4.4) 0.6 ml,以消除干扰.加入干扰消除剂的采样瓶

121 ℃高压蒸汽灭菌

20 min,采样瓶外壁及包扎纸干燥后可 用于样品采集.酸性样品,需在分析前按无菌操作要求调节样品的 pH 值至 7.0~8.0. 注2:10 mg 硫代硫酸钠可保证去除水样中 1.5 mg 余氯,硫代硫酸钠用量可根据水样实际余氯量调整.

7 分析步骤 以下步骤均在无菌操作的条件下进行. 7.1 接种水样的准备 当每张纸片接种水样量为

10 ml 或1ml 时,充分混匀水样备用即可. 当每张纸片接种水样量小于

1 ml 时,水样应制成稀释样品后使用.接种量为 0.1 ml、0.01 ml 时,分别 制成 1:10 稀释样品、1:100 稀释样品.其他接种量的稀释样品依次类推. 1:10 稀释样品的制作方法为:吸取