PDF《纸片快速法》

1 ml 水样,注入盛有

9 ml 无菌水的试管中,混匀,制成 1:10 稀释 样品.其他稀释度的稀释样品同法制作. 7.2 水样接种 7.2.1 接种量 每个样品按三个

10 倍递减的不同接种量接种,每个接种量分别接种

5 张纸片,共接种

15 张纸片. 根据水样的污染程度确定接种量,应尽可能使

5 个接种量最大的纸片为阳性、

5 个接种量最小的纸片为 阴性,避免出现所有三个不同接种量共

15 张纸片全部为阳性或者全部为阴性. 清洁水样的参考接种量分别为

10 ml、1 ml、0.1 ml,受污染水样参考接种量根据污染程度可接种

1 ml、 0.1 ml、0.01 ml 或0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml 等,见下表 1. 7.2.2 接种 清洁水样,接种水样总量为 55.5 ml,10 ml 水样量纸片

5 张,每张接种水样

10 ml,1 ml 水样量纸片

10 张,其中

5 张各接种水样

1 ml,另5张各接种 1:10 的稀释水样

1 ml.受污染水样,接种

3 个不同稀释度的

1 ml 稀释水样各

5 张.

4 接种水样应均匀滴加在纸片上,纸片充分浸润、吸收水样,用手在聚丙烯塑膜袋外侧轻轻抚平,做好 标记. 注3:纸片加入水样后,短时间内变黄或褪色,表明水样存在酸性物质或氧化剂干扰,需按 6.3 干扰和消除 去除. 表1水样接种量参考表 水样类型 接种量(ml)

10 1 0.1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 湖水、水源水 河水 生活污水 医疗机构排放污水(处理后) 禽畜养殖业等排放废水 7.3 培养 检测总大肠菌群时,在37±1 ℃的条件下培养 18~24 h 后观察结果;

检测粪大肠菌群时,在44.5±0.5 ℃ 的条件下培养 18~24 h 后观察结果. 注4:检测粪大肠菌群时,纸片接种后应立即放置于 44.5±0.5 ℃的恒温培养箱中培养,在常温下放置过久将影响检测结 果的准确性. 7.4 对照试验 7.4.1 空白对照 用无菌水做全程序空白测定,培养后的纸片上不得有任何颜色反应,否则,该次样品测定结果无效, 应查明原因后重新测定. 7.4.2 阳性及阴性对照 总大肠菌群测定的阳性菌株为大肠埃希氏菌(Escherichia coli),阴性菌株为金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus);

粪大肠菌群测定的阳性菌株为大肠埃希氏菌(Escherichia coli),阴性菌株为产 气肠杆菌(Enterobacter aerogenes). 上述标准菌株均制成浓度为 300~3000 个/ml 的菌悬液,分别取相应水量的菌悬液接种纸片,阳性与 阴性菌株各

5 张,按 7.3 培养 要求培养,大肠埃希氏菌应呈现阳性反应;

金黄色葡萄球菌、产气肠杆菌应 呈现阴性反应,否则,该次样品测定结果无效,应查明原因后重新测定. 注5:可先制备较高浓度菌悬液,采用血球计数器在显微镜下对其浓度进行初步测定,然后根据实际情况用无菌水稀释 至300~3000 个/ml. 7.5 结果判读 (1)纸片上出现红斑或红晕且周围变黄,为阳性. (2)纸片全片变黄,无红斑或红晕,为阳性. (3)纸片部分变黄,无红斑或红晕,为阴性. (4)纸片的紫色背景上出现红斑或红晕,而周围不变黄,为阴性. (5)纸片无变化,为阴性. 结果判读参照图片见附录 A.

5 8 结果计算与表示 8.1 结果计算 根据不同接种量的阳性纸片数量,查MPN 表(附录 B)得到 MPN 值(MPN /

100 ml),按公式(1) 换算并报告

1 L 水样中总大肠菌群或粪大肠菌群数: Q M

100 C ? ? (1) 式中: C――水样总大肠菌群或粪大肠菌群浓度(MPN / L) M――查MPN 表得到的 MPN 值(MPN /

100 ml) Q――实际水样最大接种量(ml) 100――为10*10 ml,其中,10 将MPN 值的单位 MPN/100 ml 转换为 MPN/L,10 ml 为MPN 表中 最大接种量 8.2 结果表示 测定结果保留二位有效数字,大于等于