PDF《DB33》

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050 C53 备案号: 浙江省地方标准DB33 DB33/T 625.3―2007 无公害豆芽 第3部分:6-苄基腺嘌呤残留量和 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定 2007-02-05 发布 2007-03-05 实施 浙江省质量技术监督局 发布DB33/T 625.3―2007 I 前言DB33/ 625-2007《无公害豆芽》分为三个部分: ――第1部分:生产技术规程;

――第2部分:质量安全要求;

――第3部分:6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定. 本部分为DB33/ 625-2007《无公害豆芽》第3部分. 本部分的附录A和附录B为资料性附录. 本部分起草单位:浙江省疾病预防控制中心、宁波市疾病预防控制中心、杭州市质量技术监督检测 院、浙江省农业厅农作物管理局、宁波市卫生监督所、宁波市五龙潭蔬菜食品有限公司、宁波市质量技 术监督局. 本部分主要起草人:李小平、韩见龙、蔡增轩、金米聪、赵建阳、芮昶、蒋经伟、陶礼明、戴建刚. DB33/T 625.3―2007

1 无公害豆芽 第3部分:6-苄基腺嘌呤残留量和 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定 第一法 豆芽中 6-苄基腺嘌呤残留量的测定――LC-MS/MS 法1范围 本方法规定了豆芽中6-苄基腺嘌呤的测定方法. 本方法适用于豆芽中6-苄基腺嘌呤的测定. 本方法检出限为1*10 -6 mg/kg.

2 原理 豆芽中残留的6-苄基腺嘌呤经酸化甲醇提取,反相柱分离,电喷雾离子化(ESI)和多离子反应监 测(MRM) 方式进行定量测定. 以试样峰的保留时间、 母离子 (m/z: 226.20[M+H]+) 与子离子(226.20>

91.0, 226.20>

147.90)定性,以子离子(226.20>

91.0)峰面积外标法定量.

3 试剂 除非另有规定,仅使用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水. 3.1 乙酸. 3.2 乙腈(HPLC). 3.3 甲醇(HPLC). 3.4 50%的甲醇水溶液. 3.5 酸化甲醇:每100 mL 甲醇中加入乙酸 50μL,混匀. 3.6 标准溶液的配置: 3.6.1 标准储备溶液 精密称取6-苄基腺嘌呤(含量>

98.0%)0.1000g于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度, 作为标准储备溶液.此标准储备溶液每毫升相当于1.0 mg 6-苄基腺嘌呤.标准使用液用甲醇稀释至每 毫升含1μg的6-苄基腺嘌呤.在4℃冰箱中储存,有效期1个月. 3.6.2 标准工作溶液 3.6.2.1 空白豆芽萃取液制备 选择在生产过程中未添加6-苄基腺嘌呤的豆芽菜.按5.1 试样处理方法提取,经0.22μm有机 滤膜过滤.必要时使用LC-MS/MS分析,以确定在6-苄基腺嘌呤出峰处不存在干扰. 3.6.2.2 标准工作溶液系列配制 准确吸取标注使用液1μL、 2μL、 4μL、 6μL、 8μL、 10μL于进样瓶中, 加空白豆芽萃取液 (3.6.2.1) 至1 mL.配制成浓度依次为1 ng/mL、2ng/mL、4 ng/mL、6 ng/mL、8 ng/mL、10 ng/mL的标准溶液系列, 供LC-MS/MS分析.

4 仪器 4.1 组织捣碎机. DB33/T 625.3―2007

2 4.2 天平(精度 0.01 和0.0001g). 4.3 高效液相色谱-电喷雾-串联四极杆质谱(LC-ESI-MS/MS). 4.4 均质机(速度范围: 6,000-24,000 rpm). 4.5 离心机(最高转速:15,000 RPM).

5 分析步骤 5.1 试样处理 称取豆芽样品500g用食物粉碎机粉碎后,取5g样品(精确至0.01g)于50 mL聚丙烯离心管中,加入

10 mL酸化甲醇,用均质机匀质3 min,10000 rpm离心10min,上清液转入50 mL容量瓶中,样品再用10 mL 酸化甲醇重复提取一次.合并上清液,用水定容至刻度,摇匀,吸取2mL于10容量瓶中,用50%甲醇水溶 液定容至刻度,摇匀,经0.2μm 滤膜过滤,供LC-MS/MS分析. 5.2 色谱参考条件 色谱柱:Waters SunFire C18 柱(2.1mm*150mm, 5μm 颗径). 流动相 A:水(0.1%甲酸). 流动相 B:甲醇(0.1%甲酸). 流速:0.30 mL/min. 进样量: