PDF《快速参考手册》

4) 将反应混合液分装到反应板中,盖上封膜,离心以去除气泡;

5) 每个反应孔中加入等量的模板或水(NTC 孔),盖上封膜,离心以去除气泡. 4. 运行 PCR 反应: 1) 软件设置:Fast 仪器选择 Standard 模式;

设定 Target Name 和Sample Name,并指定到 各个反应孔中.其中技术重复孔的样本名称需完全相同;

2) 反应程序设置如下: 步骤 温度 时间 循环数 DNA 聚合酶激活 95℃

10 min

1 变性 95℃

15 sec

40 退火和延伸 60℃

60 sec 5. 数据分析和导出: 1) 使用定量 PCR 软件进行初步分析: ? 手动设定阈值线为 0.2;

? Auto baseline 确认为"On";

? 更改以上分析设置后,保存并再次运行软件中的"Analyze";

? 查看分析后的扩增结果;

2) 若扩增结果没有问题,导出数据文件(.txt 或.csv 格式). 3) 至ThermoFisher 官网免费下载 CopyCaller?Software (https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/technical-resources/software- downloads/copycaller-software.html),导入之前的数据文件(.txt 或.csv 格式),进行拷贝 数分析. Applied Biosystems 技术支持服务中心 800-820-8982 400-820-8982 ?

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