PDF《杜仲成熟胚器官发生途径的研究》

in the direct organogenesis way, the medium formula of adventitious bud induction was MS+6-BA(0.5mg/ L)+NAA(0.1mg/L), the induction rate was 80%, and in the indirect organogenesis way, the medium formula of callus induction was MS+BA(2.0 mg/L)+NAA(2.5 mg/L), the induction rate was 70%, the medium formula of callus induction cluster bud was MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L,the induction rate was 80%;

the medium formula of rooting was 1/2MS,the induction rate was 80%;

the transplanting matrix was the same amount of peat and perlite mixture,the transplanting survival rate was 66.7%. Key words: Eucommia ulmoides;

organogenesis way;

induction;

multiplication;

rooting 王征,等:杜仲成熟胚器官发生途径的研究

80 第6期23 日先后两次从中南林业科技大学株洲校区后山 杜仲优良品种种植基地华仲

1 号优树上采集,4℃ 冰箱保存,取其中的胚作为初代培养的外植体. 1.2 实验方法 1.2.1 外植体消毒及处理 种子消毒:中性洗衣粉洗净, 流水彻底冲洗后, 用75% 的酒精表面消毒

30 秒,用灭菌水冲洗

2 ~

3 遍后转入 0.1% 的升汞溶液中浸洗

8 分钟,后用 无菌水冲洗

6 ~

8 次,每次

2 分钟.在无菌条件下, 取出胚,待用. 1.2.2 成熟胚的初代培养 将胚接种在激素种类和浓度为BA (0.5,1.0,2.0) mg/L 和NAA(0.1,0.5,2.5)ms/L,的MS 培养基中, 共14 个处理(见表 1).每个处理接种

10 个胚, 实验重复

3 次.定期观察生长状况,1 个月后,对 生长情况进行统计芽和愈伤组织的诱导情况. 1.2.3 芽的增殖 为了进一步增加不定芽的数量,需要进行芽 增殖的培养,将初代培养所的的芽切去根部,接 种在

14 组培养基上(见表 2),每个处理接种

10 个芽,实验重复

3 次,培养

1 个月,统计丛生芽 诱导率和增殖系数. 1.2.4 愈伤组织的增殖 由初代的诱导实验筛选出比较合适的愈伤组 织诱导培养基配方为:

11、12 和13 号培养基.为 进一步增加愈伤组织的数量,需要进行愈伤组织 的增殖,故将初代诱导得到的愈伤组织切成

3 mm *

3 mm 的小块,再转接到

11 号、12 号、13 号和

14 号(CK)培养基上(见表 3),每个处理接种

10 个愈伤组织,实验重复

3 次,培养

1 个月后, 统计愈伤组织的增殖系数. 1.2.5 愈伤组织诱导丛生芽 将愈伤组织接种到BA(0.5,1.0)mg/L 和NAA(0,0.05,0.1)mg/L 的MS 培养基上(见表 4), 进行丛生芽的诱导.接种时愈伤组织切成

3 mm*

3 mm 的小块,每个处理接种

10 个愈伤,实验重 复3次,培养

1 个月后,统计愈伤组织上丛生芽 的诱导率和增殖系数. 1.2.6 不定芽的生根 当经过多次继代后的单个不定芽达到

2 ~

3 cm 左右的规格时,转接到生根培养基上进行根的 诱导.生根培养基共

6 个处理(见表 5).每个处 理接种

5 个芽,实验重复

3 次,培养

1 个月后, 统计生根率. 1.2.7 生根苗的炼苗和移栽 将生根后生长健壮的小苗移栽到经过高压灭 菌的基质中进行炼苗,基质为等量混合的泥炭土 和珍珠岩.炼苗时间为一周,期间用一次性塑料 杯罩住小苗,每天喷水保持湿度,逐渐减少喷水 频率和喷水量,并分步将一次性杯子揭开,使生 根苗逐渐适应外界条件.移栽一个月后,统计移 栽苗成活率. 以上所用培养基均为 MS(生根诱导除外,为1/2MS 基本培养基),并添加不同种类不同浓度 的激素,蔗糖 30.0 g/L,固体培养基加琼脂 6.0 g/L, 培养基均在 1.06 kg/cm2 压力下 (121℃ ),灭菌