PDF《DB46》

ICS 67.

040 B

33 备案号:45164-2015 DB46 海南省地方标准DB 46/T 313―2015 椰子粗蛋白和粗脂肪含量测定 The content determination standard of crude protein and crude fat of coconut

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02 C

06 发布

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01 实施 海 南省 质量技术 监 督局 发布DB46/T 313-2015 I DB46/T 313-2015 II 目??次 前言.III

1 范围.1

2 规范性引用文件.1

3 术语和定义.1 3.1.1 3.2.1

4 取样方法.1 4.1 取样要求.1 4.2 取样方法.2

5 粗蛋白含量测定.2 5.1 原理.2 5.2 试剂.2 5.3 仪器、器皿.2 5.4 试样制备.3 5.5 测定方法.3 5.6 质量控制.4 5.7 结果计算.4 5.8 重复性.5

6 粗脂肪含量测定.5 6.1 索氏抽提法.5 6.2 残余法.8 DB46/T 313-2015 III 前??言 本标准依据GB/T 1.1-2009给出的规则起草. 本标准由海南省林业厅提出并归口. 本标准负责起草单位:中国热带农业科学院椰子研究所. 本标准主要起草人:刘蕊 范海阔 赵松林 王萍 DB46/T 313―2015 I DB46/T 313―2015

1 椰子粗蛋白和粗脂肪含量测定

1 范围 本标准规定了椰子果实中椰肉与椰水的取样方法、粗蛋白含量测定和粗脂肪含量测定方法. 本标准适用于各种椰子品种嫩果及成熟种果中粗蛋白、粗脂肪含量的测定.

2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的. 凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件. GBT 5512-2008 粮油检验 粮食中粗脂肪含量测定 GBT 14489.2-2008 粮油检验 植物油料粗蛋白质的测定 GB 50095-2010 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定 NY/T

353 椰子 种果和种苗

3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准. 3.1 椰肉 指椰子果实中的固体胚乳,存在于椰子果实种壳和种皮内部,不易与种皮分开. 3.2 椰水 指椰子果实中的液体胚乳,存在于椰子果实种壳和种皮内部,一般被固体胚乳包围.

4 取样方法 4.1 取样要求 DB46/T 313―2015

2 嫩果采样需选择健康的椰子树,采集8-9个月果穗,取果穗中部3个果实作为分析样果,果实要健康 无病虫害.成熟种果采样需参照NY/T 353,采集完全成熟的果穗,取果穗中部3个果实,作为分析样果, 果实要健康无病虫害. 4.2 取样方法 椰肉取样:各取3个果实中部椰肉(去掉种皮)20 g~60 g,装入自封袋中备用.全部样品于-20℃ 低温下保存.椰水取样:各取3个果实的椰水30 mL~50 mL混合均匀,装入试剂瓶中备用.

5 粗蛋白含量测定 5.1 原理 在催化剂存在下,用硫酸消化试样中的有机物,使含氮物转化成硫酸铵.再加入强碱并蒸馏使氨逸 出,用硼酸吸收氨,用标准酸滴定计算含氮量,乘以蛋白质换算系数计算出粗蛋白含量. 5.2 试剂 所有试剂应为无氮化合物、分析纯,所用的水应为蒸馏水. 硫酸:18 mol/L. 混合催化剂:0.4 g硫酸铜(CuSO4・5H2O),6 g硫酸钾或硫酸钠,磨碎混匀. 氢氧化钠溶液:c(NaOH)=400 g/L,400 g氢氧化钠加水溶解并定容至1000 mL. 硼酸溶液:c(H3BO3)=20 g/L,20 g硼酸加水溶解并定容至1000 mL. 混合指示剂:1份1 g/L甲基红乙醇(95%)溶液与5份1 g/L溴甲酚绿乙醇(95%)溶液均匀混合. 盐酸标准溶液:c(HCl)=0.1 mol/L. 蔗糖. 硫酸铵:干燥. 甲基红指示剂:0.1 g甲基红溶于100 mL乙醇(95%). 5.3 仪器、器皿 分析天平:分度值0.0001 g. 粉碎机:易清理,在粉碎过程中不会使物料受热,对试样的水分、挥发物及油含量没有影响. 消化炉或电炉. 凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式. DB46/T 313―2015

3 定氮仪:基于凯氏定氮原理的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪. 凯氏烧瓶:250 mL. 收集瓶:150 mL、250 mL. 消化管:250 mL. 容量瓶:100 mL. 移液管:

20 mL. 量筒:100 mL. 滴定管:酸式. 5.4 试样制备 椰水试样用移液管量取混合椰水试样

20 mL(含氮量

3 mg~7.5 mg).椰肉试样采用机械粉碎,称取1g(含氮量

4 mg~8 mg),准确至 0.0001 g. 5.5 测定方法 5.5.1 人工法 5.5.1.1 试样消化 将制备好的试样无损失地放入凯氏烧瓶中,加入6.4 g混合催化剂与试样混合均匀,再加入12 mL 硫酸和2粒玻璃珠,充分混匀,保证试样完全与硫酸混匀或完全被硫酸浸湿.将上述烧瓶置于通风橱内 的电炉上200℃条件下加热.不时旋摇,碳化至泡沫消失,然后420℃至消化液呈透明的蓝绿色,再继续 加热1 h~2 h. 5.5.1.2 蒸馏 将消化液(5.5.1.1)冷却,加入20 mL蒸馏水,转入100 mL容量瓶中,冷却后用水稀释至刻度线, 摇匀,作为试样分解液.将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20 mL硼酸溶液的吸收液和2滴混合指 示剂的收集瓶内,蒸汽发生器的水中应加有甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,在蒸馏过程中保持此液为橙 红色,否则需补加硫酸.准确移取试样分解液10 mL~20 mL注入蒸馏装置的反应室中,用少量蒸馏水冲 洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加入10 mL氢氧化钠溶液,小心提起玻璃塞使之流入反应室,将玻璃 塞塞好,且在入口处加水密封,防止漏气.蒸馏4 min降下收集瓶使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1 min,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入收集瓶内,然后停止蒸馏. 5.5.1.3 滴定 DB46/T 313―2015

4 用5.5.1.2法蒸馏后的吸收液立即用盐酸标准溶液滴定,以溶液由蓝绿色变成粉红色为终点. 5.5.2 全自动法 5.5.2.1 试样的消煮 将制备的试样放入消化管中,加2片消化片或6.4 g混合催化剂,12 mL硫酸,于420℃下的消煮炉上 消化至消化液呈透明的蓝绿色,然后继续加热,至少0.5 h~1 h,取出冷却后加入30 mL蒸馏水. 5.5.2.2 蒸馏 采用全自动定氮仪时,按仪器本身常量程序进行测定. 5.5.2.3 滴定 5.5.2.4 用盐酸标准溶液滴定吸收液,以溶液由蓝绿色变成粉红色为终点. 5.6 质量控制 准确称取0.2000 g硫酸铵,代替试样,按5.5.1.

2、5.5.1.3和5.5.2.

2、5.5.2.3进行操作,测得的 硫酸铵含氮量应为21.19%±0.2%,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确. 称取约0.5 g蔗糖代替试样,人工法按5.5.1操作步骤进行空白测定,全自动法按5.5.2操作步骤进 行空白测定.消耗盐酸标准溶液的体积不得超过0.2 ml. 5.7 结果计算 5.7.1 椰水中粗蛋白含量 椰水粗蛋白含量(以质量体积分数计)按式(1)计算. ? ?

100 '

0140 .

0 0

1 ? ? ? ? ? ? ? V V v f c V V X 1) 式中: X 粗蛋白的含量(以质量体积分数计),%;

V1 滴定试样时所需标准酸溶液体积,单位为毫升(mL);

VO 滴定空白时所需标准酸溶液体积,单位为毫升(mL);

c 所用盐酸标准溶液浓度,单位为摩尔每升(mol/L);

v 试样体积,单位为毫升(mL);

V 试样分解液总体积,单位为毫升(mL);

V′ 试样分解液蒸馏用体积,单位为毫升(mL);

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5 0.0140 与盐酸标准溶液相当的、以克表示的氮的质量(g);

f 氮换算成蛋白质的平均系数,这里取6.25. 5.7.2 椰肉中粗蛋白含量 椰肉粗蛋白含量(以质量分数计)按式(2)计算. ? ?

100 '

0140 .

0 0

1 ? ? ? ? ? ? ? V V m f c V V X 2) 式中: X 粗蛋白的含量(以质量分数计),%;

V1 滴定试样时所需标准酸溶液体积,单位为毫升(mL);

VO 滴定空白时所需标准酸溶液体积,单位为毫升(mL);

c 所用盐酸标准溶液浓度,单位为摩尔每升(mol/L);

m 试样质量,单位为克(g);

V 试样分解液总体积,单位为毫升(mL);

V′ 试样分解液蒸馏用体积,单位为毫升(mL);

0.0140 与盐酸标准溶液相当的、以克表示的氮的质量(g);

f 氮换算成蛋白质的平均系数,这里取6.25. 5.8 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果允许相对偏差为3%. 相对偏差=[(单次测定值-平均值)/平均值]*100%

6 粗脂肪含量测定 6.1 索氏抽提法 6.1.1 原理 将粉碎、分散且干燥的试样用有机溶剂回流提取,使试样中的脂肪被溶剂抽提出来,回收溶剂后所 得到的残留物,即为粗脂肪. 6.1.2 试剂 无水乙醚:分析纯. DB46/T 313―2015

6 注1:不能用石油醚代替乙醚,因为它不能溶解全部的植物脂类物质. 6.1.3 仪器和用具 分析天平:分度值0.0001g. 鼓风干燥箱箱:50℃~200℃. 电热恒温水浴锅:37℃~100℃. 备有变色硅胶的干燥器. 索氏提取器:各部件应洗净,在105℃温度下烘干,其中接收瓶烘至恒重. 粉碎机、刨丝器. 移液管:50 mL. 蒸发皿、一端扁平的玻棒. 滤纸筒(无脂). 脱脂线、脱脂细沙、脱脂棉. 6.1.4 试样制备 6.1.4.1 椰水试样 用移液管量取椰水20 mL~30 mL,置于蒸发皿中,加入约20 g脱脂细沙,于沸水浴上蒸发水分,用 一端扁平的玻璃棒不断搅拌,直至松散状;

在100℃±5℃干燥,全部移入滤纸筒内.蒸发皿及附有试样 的玻棒,均用沾有乙醚的脱脂棉擦净,并将棉花放入滤纸筒内,并用脱脂线捆好. 6.1.4.2 椰肉试样 将椰肉用刨丝器刨成细条状,称取20.0000 g~40.0000 g,于70℃±5℃干燥至恒重后,用粉碎机 粉碎至适当粒度.称取1.0000 g~2.0000 g,全部移入滤纸筒内,最后再用脱脂棉塞入上部,压住试样, 用脱脂线捆好. 6.1.5 操作步骤 6.1.5.1 抽提 将滤纸筒放入索氏提取器的抽提筒内, 连接已干燥至恒重的接收瓶, 由抽提器冷凝管上端加入无水 乙醚至虹吸管高度以上.提取液流净后,再加提取液至虹吸管高度的三分之一处,连接回流冷凝管.将 接收瓶放在水浴锅上加热,使乙醚不断回流提取(6次/h~8次/h),一般抽提8 h~12 h.提取结束时, 用磨砂玻璃接取一滴提取液,磨砂玻璃上无油斑表明提取完毕. DB46/T 313―2015

7 6.1.5.2 称量 取下接收瓶,回收乙醚,待接收瓶内乙醚剩1 mL~2 mL时在水浴上蒸干,用脱脂滤纸擦净接收瓶外 部,于100℃±5℃电热恒温箱中干燥2 h,放干燥器内冷却至室温后称量.重复以上操作直至两次称量 差不超过0.0020g. 6.1.6 结果计算 6.1.6.1 椰水中粗脂肪的含量 椰水中粗脂肪的含量(以质量体积分数计)按式(3)计算.

100 0

1 ? ? ? V m m X 3) 式中: X 试样中粗脂肪的含量,单位为克每百毫升(g/100 mL);

m1 接收瓶和粗脂肪的质量,单位为克(g) ;

m0 接收瓶的质量,单位为克(g) ;

V 试样的体积,单位为毫升(ml).计算结果表示到小数点后一位. 6.1.6.2 椰肉中粗脂肪的含量 椰肉中粗脂肪的含量(以质量分数计)按式(4)计算.

100 2

0 1 ? ? ? m m m X 4) 式中: X 试样中粗脂肪的含量,单位为克每百克(g/100g);

m1 接收瓶和粗脂肪的质量,单位为克(g) ;

m0 接收瓶的质量,单位为克(g) ;

m2 试样的质量(烘干水分前的质量),单位为克(g).计算结果表示到小数点后一位. 6.1.7 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果允许相对偏差为3%. 相对偏差=[(单次测定值-平均值)/平均值]*100% DB46/T 313―2015

8 6.2 残余法 6.2.1 原理 将一定质量的粉碎、分散且干燥的试样放入抽提器中,用能与脂肪溶混的有机溶剂除去脂肪,称量 残渣质量,则样品质量与残渣质量之差即为粗脂肪的含量. 6.2.2 试剂 无水乙醚:分析纯. 6.2.3 仪器和用具 分析天平:精确度0.0001 g. 粉碎机. 鼓风干燥箱箱:50℃~200℃. 电热恒温水浴锅:37℃~100℃. YG-2型脂肪抽提器. 刨丝器. 培养皿:直径11 cm~13 cm. 干燥器:直径15 cm~18 cm,备有变色硅胶. 称量瓶:直径3.5*7 cm 滤纸,中速,无脂. 6.2.4 试样制备 6.2.4.1 滤纸包准备 将滤纸切成 7*7 cm 大小,并叠成一边不封口的纸包,用铅笔编上序号,顺序排列在培养皿中,每 皿不得多于

20 包.将培养皿连同滤纸包移入 105±2℃电热恒温箱中干燥

2 h.取出放入干燥器中........