PDF《袁圆六味补气胶囊对肺气虚型慢性阻塞性肺疾病大鼠_袁圆》

窑实验研究窑 收稿日期院圆园员猿原园圆原圆远 基金项目院国家自然科学基金渊愿员园苑圆苑愿员冤 作者简介院吕磊渊员怨苑员原冤袁女袁实验师袁医学学士袁主要从事病理技术和病理学实验教学工作遥 通信作者院王成阳渊员怨苑猿原冤袁男袁主治医师袁在读博士研究生遥 研究方向院肺气虚证的基础和临床应用研究遥 耘鄄皂葬蚤造院憎葬灶早糟澡藻灶早赠葬灶早苑猿岳 员圆远援 糟燥皂 六味补气胶囊对肺气虚型慢性阻塞性肺疾病大鼠 肺组织病理形态及热休克蛋白 苑园 表达的影响 吕摇 磊员 袁王成阳圆 袁李泽庚员 袁彭青和员 袁王婕琼圆 袁季乔雪员 袁鹿摇 林员 袁刘向国员 渊员援 安徽中医学院袁安徽摇 合肥摇 圆猿园园猿愿曰圆援 湖北中医药大学袁湖北摇 武汉摇 源猿园园远缘冤 摘要院目的摇 探讨六味补气胶囊对肺气虚型慢性阻塞性肺疾病渊悦韵孕阅冤大鼠肺组织病理形态学和热休克 蛋白 苑园渊匀杂孕苑园 蛋白冤表达的影响遥 方法摇 将健康 杂阅 大鼠 缘园 只随机分为正常对照组尧模型组尧六味补气胶囊 高剂量组尧六味补气胶囊低剂量组及脾氨肽组遥 采用烟熏加脂多糖渊蕴孕杂冤气管滴入法建立 悦韵孕阅 肺气虚证实验 动物模型袁各组灌胃相应的药物或生理盐水遥 光镜下观察肺组织的病理形态学改变并评分袁免疫组化 杂孕 法检 测肺组织 匀杂孕苑园 蛋白的表达遥 结果摇 模型组肺组织病理评分各项指标明显高于正常对照组渊孕约园援 园员冤袁六味补 气胶囊高剂量组与脾氨肽组肺组织支气管黏膜上皮病变尧支气管壁炎细胞浸润 圆 项指标病理评分显著低于模 型组渊孕约园援 园缘 或 孕约园援 园员冤袁六味补气胶囊低剂量组与模型组比较差异无统计意义渊孕跃园援 园缘冤遥 与正常对照组比 较袁模型组 匀杂孕苑园 蛋白在肺组织支气管上皮细胞尧肺泡上皮细胞和炎症细胞中高表达渊孕约园援 园员冤曰六味补气胶囊 高剂量组与脾氨肽组 匀杂孕苑园 蛋白表达显著低于模型组袁圆 组比较差异有统计意义渊孕约园援 园缘冤曰六味补气胶囊低剂 量组 匀杂孕苑园 蛋白表达与模型组比较差异无统计意义渊孕跃园援 园缘冤遥 结论摇 六味补气胶囊能够减轻 悦韵孕阅 肺气虚 证大鼠肺组织的损伤程度及炎症反应袁降低 匀杂孕苑园 蛋白的表达遥 关键词院六味补气胶囊曰肺气虚型曰慢性阻塞性肺疾病曰病理形态曰热休克蛋白 苑园 中图分类号院砸圆愿缘援 缘摇 文献标志码院月摇 文章编号院员园园猿原愿源缘园渊圆园员猿冤园猿原园园园员原园缘 摇摇慢性阻塞性肺疾病渊糟澡则燥灶蚤糟 燥遭泽贼则怎糟贼蚤增藻 责怎造皂燥灶葬鄄 则赠 凿蚤泽藻葬泽藻袁悦韵孕阅冤 是一种常见的尧可预防的慢性呼 吸系统疾病袁患病人数多袁病死率高袁且严重影响患 者的劳动能力和生活质量袁是世界范围内患病和死 亡的主要原因之一袁其发病率和死亡率正逐渐上升遥 肺气虚证是 悦韵孕阅 稳定期的一种常见证型咱员 原 圆暂 遥本实验采用烟熏加脂多糖渊蕴孕杂冤气管滴入的方法建立 悦韵孕阅 肺气虚证实验动物模型袁观察六味补气胶囊 对 悦韵孕阅 肺气虚证模型大鼠肺组织病理形态和热休 克蛋白 苑园渊匀杂孕苑园 蛋白冤 表达的影响袁从而为治疗 悦韵孕阅 肺气虚证提供实验依据遥 员摇 材料与方法 员援 员摇 材料 员援 员援 员摇 实验动物摇 健康 杂阅 大鼠 缘园 只袁杂孕云 级袁雌 雄各半袁体质量 员缘园 耀 圆园园 早袁由南通大学实验中心提 供袁生产许可证号院杂悦载运渊苏冤圆园园愿原园园员园遥 员援 员援 圆摇 药品与试剂摇 六味补气胶囊由炙黄芪 员缘 早尧 人参 员园 早尧玉竹 员园 早尧益智仁 远 早尧陈皮 远 早尧肉桂 猿早等药物组成袁由安徽中医学院第一附属医院制剂室 提供曰蕴孕杂袁美国 杂蚤早皂葬 公司袁批号 圆园员园园员园怨缘缘愿曰香 烟采用滁州卷烟厂生产的红三环牌香烟袁焦油含量 员员 皂早 辕 支袁尼古丁含量 园援 愿 皂早 辕 支曰匀杂孕苑园 单克隆抗 体袁由北京博奥森生物技术有限公司提供袁 批号 怨愿园苑愿缘宰曰杂孕 原怨园园园 通用型免疫组化试剂盒渊 批号 员圆员远苑粤园猿冤尧阅粤月 显色试剂盒渊批号 员圆员怨远粤员园冤均购 自北京中衫金桥生物技术有限公司遥 员援 员援 猿摇 仪器摇 月酝原陨载 生物组织石蜡包埋机渊孝感 宏业医用仪器有限公司冤袁蕴耘陨悦粤 圆园员远 轮转式切片 机渊 蕴耘陨悦粤 公司冤袁 韵蕴再酝孕哉杂 月载缘员 显微 镜渊日本 韵蕴再酝孕哉杂 光学工业株式会社冤袁栽杂原员圆 生物组织自 动脱水机 渊孝感宏业医 用仪器 有限公司冤袁 捷达允阅原愿园员阅 形态学图像分析系统渊南京捷达科技发展 有限公司冤遥 员援 圆摇 方法 员援 圆援 员摇 动物分组尧造模及给药方法摇 将大鼠随机分 为正常对照组尧模型组尧六味补气胶囊高剂量组尧六 要员要第猿园 卷第猿期圆园员猿 年远月摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇甘肃中医学院学报允郾 郧粤晕杂哉 悦韵蕴蕴耘郧耘 韵云 栽悦酝 摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇灾燥造郾 猿园摇 晕燥郾 猿 允怎灶援 圆园员猿 味补气胶囊低剂量组及脾氨肽组袁每组 员园 只遥 按照 文献咱猿暂方法造模袁于实验第 员 天尧第 员源 天采用 远豫 水合氯醛麻醉大鼠后袁 手术暴露气 管袁 注入 蕴孕杂 渊员 皂早 辕 皂蕴冤圆园园 滋蕴 至气管内遥 蕴孕杂 滴入次日开始袁 将大鼠置于自制的烟室中袁用锯末 缘园 早加员园 支红 三环牌香烟烟丝混合点燃烟熏袁每日烟熏 员 次袁每次 猿园 皂蚤灶袁造模周期 圆愿 凿遥 造模 圆愿 凿 后袁六味补气胶囊 高剂量组及低剂量组灌服六味补气胶囊混悬液袁灌 胃剂量分别为 园援 怨 早辕 渊噪早窑凿冤 渊相当于成人常规临 床用量的 圆园 倍冤 及 园援 圆圆缘 早辕渊噪早窑凿冤 渊相当于成人 常规临床用量的 缘 倍冤曰脾氨肽组灌服脾氨肽混悬 液 园援 圆源愿 皂早 辕 渊噪早窑凿冤渊相当于成人常规临床用量的 缘 倍冤曰正常对照组和模型组灌服生理盐水遥 各组均 灌胃 员园 皂蕴辕 渊噪早窑凿冤袁员 次辕 凿袁共 员源 凿遥 员援 圆援 圆摇 指标测定摇 每天观察大鼠的一般情况袁包括 活动度尧对外界反应的灵敏度尧精神状况尧皮毛光泽 度尧饮食和大便情况及呼吸系统体征渊包括咳嗽尧呼 吸道分泌物尧气道痰鸣音等冤遥 给药结束次日袁取右 肺上叶及肺门组织经 员园豫 中性甲醛固定 源愿 澡 后进 行常规冲洗尧脱水尧透明尧浸蜡尧包埋袁切片厚 缘 滋皂袁 行 匀耘 染色和免疫组化染色遥 员冤肺组织病理观察指标及评分方法咱源暂 遥 渊员冤支 气管黏膜上皮袁纤毛病变院粘连尧倒伏或脱失遥 渊圆冤 上皮病变院糜烂尧脱落或鳞化遥 渊猿冤杯状细胞增生情 况遥 以上 猿 项均分为无病变及轻尧中尧重度异常袁分 别评为 园袁员袁圆袁猿 分遥 渊源冤 支气管壁炎性细胞浸润院 根据数量尧范围及浸润深度袁分为无尧少量尧中量及多 量袁分别评为 园袁员袁圆袁猿 分遥 渊缘冤 支气管及周围肺泡 病变院根据肺泡腔内炎性渗出多少及范围袁分为无渗 出尧少数腔内有渗出尧圆园豫 以上腔内有渗出尧缘园豫 以 上腔内有渗出袁分别评为 园袁员袁圆袁猿 分遥 渊远冤 支气管 周围肺泡气肿与萎陷院分为无气肿萎陷尧少数出现尧 成片出现尧弥漫出现袁分别评为 园袁员袁圆袁猿 分遥 各组大 鼠按上述指标评分袁然后累加为每一指标的得分遥 圆冤匀杂孕苑园 免疫组化染色遥 采用免疫组化 杂孕 法 进行染色袁阴性对照采用 孕月杂 替代一抗进行袁苏木 素轻度复染袁每张切片观察 缘 个视野袁阳性染色为棕 黄色颗粒袁采用南京捷达 允阅原愿园员 图像分析系统对 匀杂孕苑园 蛋白的表达进行图象分析袁表达强度用平均 光密度表示遥 员援 猿摇 统计学分析 数据统计采用 杂孕杂杂员苑援 园 统计软件处理袁等级 资料采用秩和检验袁多组间比较采用 运则怎泽噪葬造鄄憎葬造造蚤泽 匀 检验袁圆 组间比较采用 酝葬灶灶鄄憎澡蚤贼灶藻赠 哉 检验曰计量 资料采用 曾依泽 表示袁多组间比较采用单因素方差分 析袁组间两两比较采用 蕴杂阅 法遥 圆摇 结果 圆援 员摇 生物学特性观察 正常对照组大鼠活泼好动袁毛发光泽袁食量正 常袁体质量逐渐增加曰呼吸平稳袁呼吸道无分泌物袁未 闻及痰鸣音遥 模型组大鼠逐渐出现蜷伏少动袁拱背 蜷卧袁撮毛袁食量减少袁毛失光泽尧发黄尧易脱落袁大便 稀溏袁体质量较正常对照组减轻曰呼吸急促袁呼吸道 有分泌物从口鼻流出袁偶可闻及咳嗽及气道痰鸣音袁 随着造模时间的延长袁上述症状逐渐加重遥 各给药 组大鼠上述症状和体征有不同程度的改善遥 圆援 圆摇 各组大鼠肺组织形态学变化及病理形态学评分 正常对照组支气管未见大量炎性细胞浸润袁黏 膜纤毛柱状上皮细胞完整袁纤毛排列整齐袁肺泡壁完 整袁肺泡结构正常连续袁气道管壁无增厚遥 模型组支 气管壁增厚袁支气管平滑肌不规则增厚袁胶原纤维增 多袁支气管黏膜上皮纤毛粘连尧倒伏或脱失袁上皮变 性坏死或脱落袁杯状细胞增多袁上皮细胞呈立方状或 鳞化袁支气管壁有程度不同的炎性细胞浸润袁以淋巴 细胞为主袁并可见少量中性粒细胞遥 细支气管及肺 泡管尧肺泡囊均扩张袁部分肺泡管扩张袁呈不规则气 囊腔袁甚至融合成肺大泡遥 肺小动脉充血袁周围水 肿袁有少量淋巴细胞浸润袁管壁未见明显增厚遥 各治 疗组病理改变较模型组有不同程度的减轻袁其中六 味补气胶囊高剂量组尧脾氨肽组可显著减轻纤毛粘 连尧倒伏尧脱落袁上皮变性坏死尧脱落袁杯状细胞增生袁 支气管壁炎性细胞浸润袁六味补气胶囊低剂量组作 用较弱遥 与正常对照组比较袁模型组大鼠肺组织支气管 黏膜上皮尧支气管壁炎性细胞浸润尧支气管及周围肺 泡病变的各项指标评分显著增高袁圆 组比较差异有 高度统计意义渊孕约园援 园员冤 遥 与模型组比较袁六味补 气胶囊高剂量组和脾氨肽组大鼠肺组织在纤毛粘 连尧倒伏尧脱落袁上皮变性坏死尧脱落袁杯状细胞增生袁 支气管壁炎性细胞浸润 源 项指标方面的评分显著降 低袁差异有统计意义渊孕约园援 园缘 或 孕约园援 园员冤曰六味补 气胶囊低剂量组大鼠肺组织病理形态学各项指标评 分有所降低袁但与模型组比较差异无统计意义渊孕跃 园援 园缘冤遥 六味补气胶囊高剂量组与低剂量组大鼠上 述源项指标评分比较袁差异有高度统计意义渊 孕约园援 园员冤袁详见表 员尧图 员遥 要圆要第猿园 卷第猿期圆园员猿 年远月摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇甘肃中医学院学报允郾 郧粤晕杂哉 悦韵蕴蕴耘郧耘 韵云 栽悦酝 摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇灾燥造郾 猿园摇 晕燥郾 猿 允怎灶援 圆园员猿 表 员摇 各组病理观察指标评分比较 组别 灶 支气管黏膜上皮病变 纤毛粘连尧 倒伏尧脱落 上皮变性 坏死尧脱落 杯状细胞 增生 支气管壁 炎性细胞 浸润 支气管及周围肺泡病变 渗出 气肿 正常对照组 员园 摇 源鄢鄢 摇 圆鄢 鄢摇猿鄢 鄢摇怨鄢 鄢摇园鄢 鄢摇园鄢 鄢 模型组 员园 摇 圆缘 摇 圆源 摇 圆愿 摇 圆怨 摇 员远 摇 员源 六味补气胶囊高剂量组 员园 摇 员圆鄢 摇 员员鄢 摇 员员鄢鄢 摇 员远鄢 鄢摇苑摇远六味补气胶囊低剂量组 员园 摇 圆源银银 摇 圆圆银 银摇圆远银 银摇圆缘银 银摇员源 摇 员猿 脾氨肽组 员园 摇 员猿鄢 摇 员源鄢 摇 员员鄢 鄢摇员苑鄢 鄢摇愿摇缘摇摇摇注院与模型组比较鄢孕约园援 园缘袁鄢鄢孕约园援 园员曰与六味补气胶囊高剂量组比较银银孕约园援 园员遥 粤 正常对照组曰月 模型组曰悦 六味补气胶囊高剂量组曰阅 六味补气胶囊低剂量组曰耘 脾氨肽组 图 员摇 各组大鼠肺组织病理图渊匀耘袁伊员园园冤 圆援 猿摇 各组大鼠肺组织 匀杂孕苑园 蛋白表达 阴性对照组 匀杂孕苑园 蛋白未见表达曰正常对照组 肺组 织支气管上皮细胞尧 部分肺泡上皮细胞中匀杂孕苑园 蛋白呈弱阳性表达曰模型组肺组织支气管上 皮细胞尧肺泡上皮细胞和炎症细胞中 匀杂孕苑园 蛋白呈 强阳性表达袁其平均光密度值显著高于正常对照组 渊孕约园援 园员冤曰六味补气胶囊高剂量组与脾氨肽组肺组 织中的 匀杂孕苑园 蛋白呈弱阳性表达袁与模型组比较袁 平均光密度值显著降低渊孕约园援 园缘冤曰六味补气胶囊低 剂量组肺组织中 匀杂孕苑园 蛋白呈强阳性表达袁平均光 密度 值较模型组有所降低袁 但圆组比较差异无统计意义渊孕跃园援 园缘冤曰六味补气胶囊高剂量组与低 剂量组比较袁差异有统计意义渊孕约园援 园缘冤袁详见表 圆尧 图 圆遥 表 圆摇 各组 匀杂孕苑园 蛋白表达阳性细胞的平均 光密度值比较渊 曾依泽冤 摇摇摇组别 灶 平均光密度值 正常对照组 员园 园援 圆愿怨依园援 园员员鄢鄢 模型组 员园 园援 猿苑愿依园援 园圆猿 六味补气胶囊高剂量组 员园 园援 猿猿员依园援 园员苑鄢 六味补气胶囊低剂量组 员园 园援 猿远苑依园援 园圆园银 脾氨肽组 员园 园援 猿圆远依园援 园员远鄢 摇摇注院与模型组比较鄢孕约园援 园缘袁鄢鄢孕约园援 园员曰与六味补气 胶囊高剂量组比较银孕约园援 园缘遥 要猿要第猿园 卷第猿期圆园员猿 年远月摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇甘肃中医学院学报允郾 郧粤晕杂哉 悦韵蕴蕴耘郧耘 韵云 栽悦酝 摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇灾燥造郾 猿园摇 晕燥郾 猿 允怎灶援 圆园员猿 粤 阴性对照组曰月 正常对照组曰悦 模型组曰阅 六味补气胶囊高剂量组曰耘 六味补气胶囊低剂量组曰云 脾氨肽组 图 圆摇 各组大鼠肺组织免疫组化染色图渊伊圆园园冤 猿摇 讨论 热休克蛋白渊澡藻葬贼 泽澡燥糟噪 责则燥贼藻蚤灶袁匀杂孕冤又称应激 蛋白渊泽贼则藻泽泽 责则燥贼藻蚤灶袁杂孕冤袁是生物进化中高度保守尧广 泛存在于原核及真核生物的一类蛋白质遥 在发热尧 缺氧尧营养缺乏尧中毒尧损伤和感染等情况下袁细胞内 匀杂孕 合成明显增加袁被认为与应激状态下细胞的自 我保护有关遥 匀杂孕苑园 亚家族是最保守尧最主要的一 类袁在大多数生物中含量最多咱 缘暂遥匀杂孕苑园 具有多种 重要的生物学功能袁在充当分子伴侣参与其他蛋白 质的装配尧折叠尧转运袁保护细胞免受有害因素损伤袁 在抗细胞凋亡尧抗氧化以及免疫应答中都起着重要 作用咱 远暂遥匀杂孕苑园 在抗感染免疫尧自身免疫及肿瘤免 疫中可以作为免疫系统攻击的靶分子参与免疫应 答袁因此逐渐引起人们关注袁.

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