PDF《SHENTEK》

SHENTEK ? 宿主细胞残留 DNA 样本前处理 试剂盒(磁珠法) rDNApurify 操作说明书 货号:SK030220DH100 版本:A/0 仅供研究用 湖州申科生物技术有限公司 版本:A/0 SHENTEK? 第1页共10 页?试剂盒简介 宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒(磁珠法)用于生物 制品样本的前处理,可稳定高效地获得样本中的微量宿主细胞 DNA.

本试剂盒适用于多种基质缓冲溶液,有效提取纯化微量的 DNA.可与各个 SHENTEK?宿主细胞(CHO、E.coli、Vero、酵母、NS

0、Human、MDCK、Sf9&AcNPV、Hi5&AcNPV、质粒、 SV40LTA&EIA 等)DNA qPCR 检测试剂盒配合使用. 本试剂盒配合 rDNApurifyTM HCD 前处理系统实现样品的自 动处理.在rDNApurifyTM 中已内置相应处理程序,只需一键操作 即可完成前处理. ? 试剂盒成份 表1.试剂盒组份 序号 组份 装量 储存条件 I 蛋白酶 K 缓冲液 10mlx1 瓶 室温 结合液 20ml*1 瓶 室温 洗涤液 A 30ml*1 瓶 室温 洗脱液 10ml*1 瓶 室温 稀释液 10ml*1 瓶 室温 II 磁珠 750μl*2 管2~8℃ III 蛋白酶 K 500μl*2 管-18℃及以下 糖原 500μl*2 管-18℃及以下 酵母 tRNA 50μl*1 管-18℃及以下 ? 规格:100 Extracts. 版本: A/0 SHENTEK? 第2页共9页?有效期: 规定储存条件下

24 个月. ? 实验所需但试剂盒中未含材料 ? 无水乙醇(分析纯) ? 100%异丙醇(分析纯) ? 1M 的HCl 和NaOH ? 5M 的NaCl ? PBS 缓冲液,1*,pH 7.4,无Mg 和Ca 离子 (如有必要,可用于稀释样本) ? 一次性手套 ? PCR

8 连管或

96 孔板,相应管盖或覆膜 ? 1000μl,100μl,10μl 低吸附滤芯枪头 ? 1.5ml 低吸附离心管 ? 相关设备 ? 迷你离心机 ? rDNApurifyTM HCD 前处理系统 ? 漩涡震荡器 ? 恒温水浴锅 ? 1000μl,100μl,10μl 移液枪 ?

96 深孔板及套管 ? 荧光定量 PCR 仪?超净台 版本: A/0 SHENTEK? 第3页共9页在实验前请完整阅读本说明书, 特别是注意要点 和常见问题! 实验流程 实验准备 样本准备 样本消化 提取准备 程序启动 ? 实验准备 开启新试剂盒时需完成以下工作: ? 在新开启的洗涤液 A 中加入 40ml 的无水乙醇. ? 在干净的试剂瓶中用无水乙醇和灭菌超纯水配制 70%乙醇 溶液 70ml,标记为洗涤液 B. ? 配制后的洗涤液应密封,室温保存,防止乙醇挥发. 每次实验前需预先完成以下工作: ? 准备好 100%的异丙醇. ? 准备好

1 个水浴温度,55℃. 版本: A/0 SHENTEK? 第4页共9页?单个样本所需的蛋白酶 K 消化液的准备: ? 10μl 蛋白酶 K+100μl 蛋白酶 K 缓冲液 蛋白酶 K 使用量参照下表,根据蛋白浓度可酌情增加: 样本蛋白浓度 蛋白酶 K 使用量(μl/样本) 0-100mg/ml

10 100-200mg/ml

20 按照上述单个样本的消化液用量和样本数, 计算和配制 本次实验所需的蛋白酶 K 消化液总体积. 使用前若发现蛋白酶 K 缓冲液出现结晶或沉淀, 应37℃ 水浴,待完全溶解后,震荡混匀. 蛋白酶 K 消化的完全程度会影响 DNA 的回收检测. ? 单个样本的工作结合液的准备: 200μl 结合液 + 0.2μl 酵母 tRNA +9μl 糖原 如果是提取酵母 DNA,工作结合液中不要加酵母 tRNA. 按照上述单个样本的工作结合液用量和样本数, 计算和 配制本次实验所需的工作结合液总体积. 使用前若发现结合液出现结晶或沉淀, 应37℃水浴, 待 完全溶解后,震荡混匀. ? 样本准备 ? 样本稀释:如果待检测样本是生物制品纯化过程中的上游 中间样本,可能含有较高的 DNA 含量.为了保证检测的准 确性,使样本的检测值在标准曲线线性范围之内,可以用 版本: A/0 SHENTEK? 第5页共9页1*PBS(pH7.4,无Ca 和Mg)对高 DNA 含量样本进行适 当比例的稀释后再进行样本纯化处理;