PDF《TECHNICAL DATA SHEET》

4A Biotech Co.

, Ltd. Add: NO. 88, 6th Kechuang St, Biomedical Park, Beijing Economic-Technological Development Area, 101111, China. Website: www.4abio.com Toll Free (China only): 400-7060-959 Technical support: [email protected] Annexin V-PE/7AAD Kit 凋亡检测试剂盒 相关介绍: 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细 胞膜外,使PS 暴露在细胞膜外表面.PS 是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋 亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使 PS 暴露在细胞膜外.Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性,对PS 有高度的亲和性.因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS.PS 转移到 细胞膜外不是凋亡所独特的, 也可发生在细胞坏死中.两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是 完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了.因此,可以采用 Annexin V 与7AAD 双染的方法, 通过流式检测细胞早期凋亡. 储存条件: 2-8℃避光保存,勿冰冻. 注意事项: 本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测. 此产品仅供研究,不用于临床诊断. 试剂盒组份: 1. 结合缓冲液 4x (Binding Buffer 4x) 体积:20 Tests: 4ml(4倍浓缩液)

50 Tests: 10ml(4倍浓缩液)

100 Tests: 20ml(4倍浓缩液) 稀释后溶液中各组分浓度:10mM Hepes/NaOH, pH 7.4, 140mM NaCl, 2.5mM CaCl2 2. 7-AAD Viability Staining Solution 体积:

20 Tests: 0.2ml

50 Tests: 0.5ml

100 Tests: 1.0ml 浓度: 20ug/ml 3. 重组人Annexin V/PE, (rh Annexin V/PE) 来源:大肠杆菌(E.coli) 分子量:35.8 KDa 样品量:20 Tests: 0.1ml,可用于20次实验

50 Tests: 0.25ml,可用于50次实验 Catalog No. Size FXP027-100

100 Tests FXP027-050

50 Tests FXP027-020

20 Tests TECHNICAL DATA SHEET Revision Date: 2017-09-08 4A Biotech Co., Ltd. Add: NO. 88, 6th Kechuang St, Biomedical Park, Beijing Economic-Technological Development Area, 101111, China. Website: www.4abio.com Toll Free (China only): 400-7060-959 Technical support: [email protected]

100 Tests: 0.5ml,可用于100次实验 保存方法:于50mM Tris, 100mM NaCl, 1%BSA, 0.02%NaN3,pH7.4 溶液中保存 纯度:SDS-PAGE及反相HPLC表明纯度大于98% 生物活性:Annexin V可结合于磷酯酰丝氨酸并表现出抗磷酯酶活性 操作步骤: 1. 细胞样品的准备: a)对于贴壁细胞:小心收集细胞培养液到一离心管内备用.用不含EDTA的胰酶消化细胞,至细胞可以被轻轻用移液管 或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞.再次收集到离心管内. 1000rpm左右离心5min,沉淀细胞.对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管底,可以适当延长离心时间或 稍稍加大离心力.小心吸除上清,可以残留约50?l左右的培养液,以避免吸走细胞.加入约1ml 4℃预冷的PBS,重悬 细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清. b)对于悬浮细胞:1000rpm左右离心5min,沉淀细胞.对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管底,可以适 当延长离心时间或稍稍加大离心力.小心吸除上清,可以残留约50?l左右的培养液,以避免吸走细胞.加入约1ml 4℃ 预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清. 2. 用去离子水按1:3稀释结合缓冲液(4ml 4x结合缓冲液+12ml去离子水);

3. 用1x结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1-5*106 /ml;