PDF《产品信息和操作指南》

产品信息和操作指南 达优? 冻存试剂盒 Cat# : UH-M1002-050 本试剂盒专用于科研,而非用于诊断 (1301) 达优? 冻存试剂盒 UH-M1002-050

1 目录 目录.

1 产品说明

2 试剂盒内容

3 需要实验者自行准备的试剂与仪器:3 细胞冻存程序

4 细胞复苏程序

5 注意事项:7 实验记录

10 2 产品说明 在ELISPOT检测的应用中,往往需要用到冻存的淋巴细胞样 品作为检测细胞.由于ELISPOT检测的是细胞的免疫功能,不仅 仅需要保证细胞的存活率,而且还要保证细胞的功能不发生变化. 传统的细胞冻存方法通常是为了保存细胞种,对细胞存活率的要 求不高,更没考虑保持细胞原有的免疫状态,所以传统的细胞冻 存方法已经不能满足ELISPOT检测的要求. 考虑到ELISPOT检测的特殊性,达科为公司推出了达优? 冻存 试剂盒,在冻存液中添加了一系列对细胞有特殊保护作用的保护 剂.达科为公司在自己的实验室以及国内数家客户的实验室做了 细胞冻存与复苏的实验,并且对复苏之后的细胞做了ELISPOT检测.结果表明,淋巴细胞的存活率超过90%,ELISPOT斑点形成频 率与新鲜细胞完全相同. 根据我们实验的经验,完美的细胞冻存效果需要优质的冻存 试剂加上严格、规范的实验操作.二者缺一不可,不可偏颇.为 了帮助国内的客户解决好细胞冻存的问题,达科为公司特此编撰 这份详细的细胞冻存、复苏实验操作手册,仅供参考.

3 试剂盒内容 名称规格 存放条件 达优? 重悬液(Resuspension Medium) 25mL -20 ℃ 达优? 2*冻存液( 2* Freezing Medium) 25mL -20 ℃ 需要实验者自行准备的试剂与仪器: z 热失活胎牛血清(Heat Inactivation of Fetal Calf Serum HI-FCS):4℃解冻血清,完全解冻之后,放入56°C水浴30分钟, 让补体蛋白失活.手册中所有的血清均是指热失活补体的血清. z R10培养基:RPMI-1640培养基,含谷氨酰胺,加入10%血清, 加入1%双抗. z R0培养基:RPMI-1640培养基,含谷氨酰胺,加入1%双抗,不 加血清. z ELISPOT无血清培养基:含有谷氨酰胺和双抗,打开即用. z 超净工作台;

z 可控温度离心机,配备50mL,15mL离心管的水平转头,建议 使用专业的细胞离心机;

离心管应采用无菌锥底聚丙烯管;

z P20, P200, P1000 微量移液器及吸嘴;

z 无菌0.5mL、1.5mL EP管,5mL、10mL吸管;

z 电动吸液器(Pipette Aid)及吸头;

z 细胞活性计数设备;

z 细胞冻存盒 Mr. Frosty 及无菌细胞冻存管,2mL,外螺旋;

z -80℃冰箱;

z 液氮罐;

z 37℃水浴锅;

4 细胞冻存程序 1. 将备用的细胞冻存管做上详细的记号. 细胞冻存管放入-20℃热 平衡,细胞冻存盒、达优? 重悬液、达优? 2*冻存液放入 4℃热 平衡. 2. 对要冻存的细胞进行计数,然后

4 o C,400g 离心

10 分钟. 3. (冰上操作)弃上清,根据细胞计数的结果加入 4℃的达优? 重悬液重悬,使细胞浓度调整到两倍的冻存浓度(比如想要冻 存的细胞浓度为:1*107 cells/mL,就用重悬液将细胞浓度调整 到2*107 /mL) ,然后将细胞吹打均匀.注意:重悬液不含有 DMSO,所以这一步动作可以稍微剧烈. 4. (冰上操作)逐滴加入等体积的冰浴过的达优? 2*冻存液, (细 胞浓度为 1*107 cells/mL) .注意:一定要逐滴加入,避免溶液 中DMSO 浓度的剧烈变化,详见后面的说明. 5. (冰上操作)以每管 1mL 细胞悬液的量分装入在-20℃热平衡 过的冻存管,然后将冻存管的盖子拧严实.否则液氮会渗漏进 来. 6. 立即将冻存管放入已经在 4℃热平衡过的冻存盒( Mr. Frosty ), 然后将冻存盒放入-80℃冰箱内. 也可以将冻存管放于程序降温 仪中,以1℃/分钟的速率降温到 -80℃. 7.