PDF《Cell Counting Kit-8》

WST-8 是MTT 的一种升级替代产品,和MTT 或其它 MTT 类似产品,如XTT、MTS 等相比有明显的优点.

第一,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原 生成的 formazan 不是水溶性的,需要有特定的溶剂来溶解;

而WST-8 和XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤.第二,WST-8 产生的 formazan 比XTT 和MTS 产生的 formazan 更易溶解. 第三,WST-8 比XTT 和MTS 更加稳定,使实验结果更可靠.第四,WST-8 和MTT、XTT 等相比线性范围更宽,灵敏度更高,并且更加稳定. WST-8 对细胞无明显毒性.加入 CCK-8 溶液显色后,可以在不同时间反复 用酶标仪读板,检测时间更加灵活,便于确定最佳测定时间. 产品编号 HY-K0301-100T HY-K0301-500T HY-K0301-3000T HY-K0301-12000T 包装

1 mL

5 mL

5 mL *

6 (5 mL * 6) *

4 产品名称 Cell Counting Kit-8 Cell Counting Kit-8 Cell Counting Kit-8 Cell Counting Kit-8 Cell Counting Kit-8

1 包装清单 产品概述 Cell Counting Kit-8,简称 CCK-8 试剂盒,是一种基于 WST-8 而广泛应用于 细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒. CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分.WST-8 在 电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色 的formazan (参考图1) .细胞增殖越多越快,则颜色越深;

细胞毒性越大, 则颜色越浅.对于同样的细胞,颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数 目呈线性关系 (图2) .

2 www.MedChemExpress.cn Inhibitors, Agonists, Screening Libraries MedChem Express MCE 中国 Hotline: 400-820-3792 操作说明 本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物 等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制 检测. 1. 制作标准曲线 a. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞;

b. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做 5-7 个细 胞浓度梯度,每组 4-6 个复孔;

c. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁,然后每

100 μL 培养基加

10 μL CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值,制作出一条以细胞数量为横坐标,OD 值为纵坐标的标准曲线.根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量. 使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致. 2. 细胞活性检测 a. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔) ,将培养板放在培养箱中预培养

24 小时;

b. 向每孔加入

10 μL 的CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ;

c. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时;

d. 用酶标仪测定在

450 nm 处的吸光度. 3. 细胞增殖-毒性检测 a. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔) ,将培养板放在培养箱中预培养

24 小时;

b. 向培养板加入不同浓度的待测药物;

c. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间;

d. 向每孔加入

10 μL 的CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡);

e. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时;

f. 用酶标仪测定在

450 nm 处的吸光度.

3 Na+ N N N+ N NO2 NO2 O S O O - O S O O O- N N NH N NO2 NO2 S O O - O S O O O- O 还原酶 NAD + NADH EC-H EC 图1 WST-8 和WST-8 formazan 的结构式 图2 CCK-8 的原理图 WST-8 colorless WST-8 formazan orange color Cell dehydrogenases NAD electeon mediator reduced form electeon mediator (1-methoxy PMS) NADH 保存条件 4°C 一年 -20°C 两年 长期保存,建议避光