PDF《Cell Counting Kit-8》

4 MCE 中国 400-820-3792

电话: 021-58955995 传真: 021-53700325 Email: [email protected] 4. 计算公式 细胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] * 100% 抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] * 100% As: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ;

Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液,不含药物) ;

Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液,不含细胞、药物) . Cell line : HEK293 Medium : DMEM, 10% FBS Incubation : 37°C, 5% CO2,

2 hours 注:如果待测药物有氧化性或还原性,可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养 基,去掉待测药物的影响.当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培 养基,直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可. Cell line : U87, SK-HEP1 Medium : DMEM, 10% FBS Chemicals :

200 μM Cisplatin (DDP) Incubation : 37°C, 5% CO2,

2 hours 图3 CCK-8 试剂盒检测细胞活性 Normal DDP (24 h) 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

450 OD U87 SK-HEP1 图4 CCK-8 试剂盒检测 DDP 细胞毒性 HEK293 cells R

2 =0.9998

7500 15000

22500 30000 Cell number 0.0 0.5 1.0 1.5

450 OD 注意事项 1. CCK-8 的培养时间一般为 1-4 小时,但在培养

30 分钟左右即可取出肉眼 观察显色程度,根据细胞种类而定,需要摸索条件,CCK-8 的最佳反应时 间以具体显色的最佳时间为准. 2. 使用

96 孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问 题.一方面,由于

96 孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈 的办法,改加相同量的 PBS 、水或培养液;

另一方面,可以把

96 孔板置 于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发. 3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,所以还原剂 (例如一些抗氧 化剂) 会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定. 4. 加入药物中如含有金属,对CCK-8 显色有影响.终浓度为

1 mM 的氯化 亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应,使灵敏度降 低.如果终浓度是

10 mM 的话,将会 100% 抑制. 5. 培养基中的酚红不会影响实验结果,酚红的吸光度可以在计算时,通过 扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响. 6. 本产品可以检测 ,但不能检测酵母细胞.向100 μL 培养液 中加入

10 μL CCK-8 溶液,并培养 1-4 小时或过夜. 7. CCK-8 试剂对细胞的毒性非常低.它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶 液颜色不断加深,OD 值不断增加 (注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的) . 8. 要测定细胞的具体数量,建议同时做标准曲线. 9. 建议采用多通道移液器,以减小平行孔间的差异. 10. 以下方法可以终止 CCK-8 反应 (96 孔板) : (a). 在显色反应后,将培养板放置 4°C 冰箱内.(b). 每孔加

10 μL 0.1 M HCl 溶液.(c). 每孔加

10 μL 1% (w/v) 的SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液. 注意:反应停止后,应在

24 小时内测定. 11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不 得用于食品或药品. 12. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作.

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