PDF《中华人民共和国国家标准 食物中核黄素的测定方法》

250 mL 三角瓶中,加水至

100 mL,于 水浴上煮至琼脂完全溶化,用1mol/L 盐酸趁热调节 pH 至6.8.尽快倒入试管 中,每管 3~5 mL,塞上棉塞,于高压锅内在 5.9*10

4 Pa(10 lb/in

2 )压力下灭 菌15 min,取出后直立试管,冷至室温,于冰箱中保存. 无水葡萄糖

1 g 乙酸钠(NaAc・3H2O) 1.7 g 蛋白胨 0.8 g 酵母提取物干粉 0.2 g 甲盐溶液 0.2 mL 乙盐溶液 0.2 mL 琼脂 1.2 g 3.20 0.04%溴甲酚绿指示剂:称取 0.1 g 溴甲酚绿于小研钵中,加1.4 mL 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液研磨,加少许水,继续研钵磨.用水稀释至

250 mL. 3.21 0.04%溴麝香草酚蓝指示剂:称取 0.1 g 溴麝香草酚蓝于小研钵中,加1.6 mL 和0.1 mol/L 氢氧化钠溶液研磨.加少许水,继续研磨,直至完全溶解, 用水稀释至

250 mL.

4 仪器与设备 4.1 实验室常用设备. 4.2 电热恒温培养箱. 4.3 离心沉淀机. 4.4 液体快速混合器. 4.5 离压消毒锅.

5 菌种的制备与保存 中华人民共和国卫生部 1990―03―19 批准 1990―12―01 实施 www.grainnet.cn 12391―1990 5.1 储备菌种的制备:以L・C・纯菌种接入

2 个或多个琼脂培养基管中.在37±0.5℃恒温培养箱中保温 16~24 h.贮于冰箱内,至多不超过

2 周,最好每 周移种一次.保存数周以上的储备菌种,不能立即用于制备接种液,一定要在使 用前每天移种一次,连续 2~3 d 方可使用,否则生长不好. 5.2 种子培养液的制备:取5mL 核黄素标准使用液和

5 mL 基本培养储备液于

15 mL 离心管混匀,塞上棉塞,于高压锅内在 6.9*10

4 Pa(10 lb/in

2 )压力下灭 菌15 min.每次可制备 2~4 管.

6 操作步骤 因核黄素易被日光和紫外线破坏,故一切操作要在暗室内进行. 6.1 接种液的制备:使用前一天,将菌种由储备菌种管中移入已消毒的种子培 养液中,同时制作二管.在37±0.5℃保温 16~24 h.取出后离心

10 min(3000 rpm) , 以无菌操作方法倾去上部液体, 用已消毒的生理盐水淋洗二次, 再加

10 mL 消毒生理盐水,在液体快速混合器上振摇试管,使菌种成混悬体.将此液倾入已 消毒的注射器内,立即使用. 6.2 样品的制备 6.2.1 将样品用磨粉机、研钵磨成粉末或用打碎机打成匀浆. 6.2.2 称取约含 5~10 ug 的核黄素样品(谷类约

10 g,干豆类约

4 g,肉类 约5g) ,加入

50 mL0.1 mol/L 盐酸溶液,混匀.置于高压锅内,在10.3*10

4 Pa (15 lb/in

2 )压力下水解

30 min. 6.2.3 冷至室温,用1mol/L 氢氧化钠溶液调节至 4.6(取少许水解液,用溴 甲酚绿检验,溶液呈草绿色即可). 6.2.4 加入淀粉酶或木瓜蛋白酶,每克样品加入

20 mg 酶.在40℃恒温箱中 过夜,大约

16 h. 6.2.5 冷至室温,加水稀释到

100 mL:过滤.对于脂肪量高的食物,可用乙 醚提取,以除去脂肪. 6.3 标准管的制备 两组试管中管各加核黄素标准使用液 0.

1、0.

5、1.

0、1.

5、2.

0、2.

5、3.0 mL,每管加水至

5 mL,再每管加

5 mL 基本培养储备液混匀. 6.4 样品 的制备 6.4.1 吸取样品溶液 5~10 mL,置于

25 mL 具塞试管中,用0.1 mol/L 氢氧 化钠调节 pH 至6.8(取少许溶液,用溴麝香草酚蓝检验) ,加水稀释至刻度. 6.4.2 取两组试管,各加(6.4.1)样品稀释液

1、

2、

3、4 mL,每管加水至

5 mL,每管再加

5 mL 基本培养储备液混匀. 6.

5 灭菌: 将以上样品管和标准管全部塞上棉塞, 置于高压锅内, 在6.9*10

4 Pa (10 lb/in

2 )压力下灭菌

15 min. 6.6 接种和培养 6.6.1 待试管冷至室温,在无菌操作条件下接种,每管加一滴接种液(6.1) , 接种时注射器针头不要碰试客壁,要使接种液直接滴在培养液内. 6.6.2 置于 37±0.5℃恒温箱中培养约