PDF《中华人民共和国国家标准 食物中核黄素的测定方法》

72 h,培养时每管必须在同一温度. 培养时间可延长

18 h 或减少

12 h.必要时可在冰箱内保存一夜再滴定.若用混 浊度测定法:以培养 18~24 h 为宜. 6.7 滴定 将试管中培养液倒入

50 mL 三角瓶中,加0.001%溴麝香草酚蓝溶液

5 mL, 中华人民共和国卫生部 1990―03―19 批准 1990―12―01 实施 www.grainnet.cn 12391―1990 分二次淋洗试管,洗液倒至该三角瓶中,以0.1 mol/L 氢氧化钠溶液滴定,终点 呈绿色.以第一瓶的滴定终点作为变色参照瓶.约30 min 后再换一参照瓶,因 溶液放置过久颜色变浅. 6.8 用标准核黄素溶液的不同浓度为横坐标及在滴定时所需 0.1 mol/L 氢氧化 钠的毫升数为纵坐标.绘制标准曲线. 6.9 计算

1000 100

1 * * * = F m V c X 1) 式中:X1――样品中核黄素含量,mg/100g;

c――以曲线查得每毫升试样中核黄素含量,ug/mL;

V――样品水解液定容总体积,mL;

F――试样液的稀释倍数;

m――试样质量,g;

1000 100 ――样品含量由 ug/g 换算成 mg/100 g 的系数.

7 结果的允许误差 同一实验室平行测定或重复测定结果相对偏差绝对值≤10%.

第二篇 荧光法8原理 核黄素在 440~500 nm 波长光照射下发生黄绿色荧光.在稀溶液中其荧光强 度与核黄素的浓度成正比.在波长

525 nm 下测定其荧光强度.试液再加入低亚 硫酸钠(Na2S2O4) ,将核黄素还原为无荧光的物质,然后再测定试液中残余荧光 杂质的荧光强度,两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度.

9 试剂 试验用水为蒸馏水.试剂不加说明为分析纯. 9.1 硅镁吸附剂:60~100 目. 9.2 2.5 mol/L 无水乙酸钠溶液. 9.3 10%木瓜蛋白酶:用2.5 mol/L 乙酸钠溶液配制.使用时现配制. 9.4 10%淀粉酶;

用2.5 mol/L 乙酸钠溶液配制.使用时现配制. 9.5 0.1 mol/L 盐酸:同3.7. 9.6

1 mol/L 盐酸:同3.8. 9.7 0.1 mol/L 氢氧化钠:同3.8. 9.8 20%低亚硫酸钠溶液:此液用时现配.保存在冰水浴中,4 h 内有效. 9.9 洗脱液:丙酮:冰乙酸:水(5:2:9) . 9.10 0.04%溴甲酚绿指示剂:同3.20. 9.11 3%高锰酸钾溶液. 9.12 3%过氧化氢溶液. 9.13 核黄素标准液的配制(纯度 98%) . 9.13.1 核黄素标准储备液(25 ug/mL) :同3.10. 9.13.2 核黄素标准使用液:吸取 2.00 mL 核黄素标准储备液,置于

50 mL 棕色容量瓶中,用水稀释至刻度.避光,贮于 4℃冰箱,可保存一周.此溶液每 中华人民共和国卫生部 1990―03―19 批准 1990―12―01 实施 www.grainnet.cn 12391―1990 毫升相当于 1.00 ug 核黄素.

10 仪器与设备 10.1 实验室常用设备. 10.2 高压消毒锅. 10.3 电热恒温培养箱. 10.4 核黄素吸附柱:见图. 10.5 荧光分光光度计

11 操作步骤 整个操作过程需避光进行. 11.1 样品提取 11.1.1 水分 称取 2~10 g 样品(约含 10~200 ug 核黄素)于100 mL 三角瓶中,加入

50 mL0.1 mol/L 盐酸,搅拌直到颗粒分散均匀.用40 mL 瓷坩埚为盖扣住瓶口, 置于高压锅内高压水解,10.3*10

4 Pa(15lb/in

2 )30 min.水解液冷却后,滴加

1 mol/L 氢氧化钠,取少许水解液,用0.04%溴甲酚绿检验呈草绿色,pH 为4.5. 11.1.2 酶解 11.1.2.1 含有淀粉的水解液:加入

3 mL10%淀粉酶溶液,于37~40℃保温 约16 h. 11.1.2.2 含高蛋白的水解液:加3mL10%木瓜蛋白酶溶液,于37~40℃保 温约

16 h. 11.1.3 过滤 上述酶解液定容至 100.0 mL,用干滤纸过滤.此提取液在 4℃冰箱中可保存 一周. 中华人民共和国卫生部 1990―03―19 批准 1990―12―01 实施 www.grainnet.cn 12391―1990 11.2 氧化去杂质 11. 2.