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5 Th e~ a l y a i s o f pl a ~ r a l d p K7

6 G2 wi t h t e a I x i c t i o n e n d 锄ucleas罄(A^D NA / Hi a d l

1 ] ;

B. E mR I ;

C E c o R I a n d P a t I D B a mH I;

E. 眦Ⅱ;

F. B 蚍EⅡ) 图6质粒pT76Gf 限惴性内切醵分析 Fi g

6 T he~ a l y s i s o f p l a ~ r al d p T7

6 Gf 、 wi t h 瑚ctloaend锄ucleas朗(A. DNA, Hi n d l I I ;

B. E c o RI ;

C E c o R I姐d S a l I D . B a mH I;

E . aa I ;

F P v u Ⅱ) 图7质粒 p T

7 6 GI 一【 限制性 内切 酶分析 Fi g

7 1 ~ a l y s l s o f p p 订6G1―

1 、 t h 瑚u6onen&

mu c l e a s e s ( A ^D NA / Hi n a Ⅲ ;

B Ec o RI;

, C E c o RI a n d S a l I;

D. B a mH] ;

E H i n d 【 Ⅲ ;

F P Ⅷ Ⅱ;

G. c I a I)

2 G1和G2的表达 图8质粒 p '

r

7 6 G 2―1 碾1 日j性内切酶分析 F

8 Tb e i 5d- 哪丑 i d p T7

6 G 2―1 wl t h r e s t t l c t l o n e n d o n u de B s e s ( A. ^DNA / Hi 【 l d

1 1

1 ;

B. Ec o RI ;

c B 盯nH1 ;

D. B s t EⅡ ;

E. Hi n c Ⅱ ) 经SDS―P AG E发现, 用pKK

2 2 3―3构建 的G1和(表达 质粒 p K7

6 G1和pK76G2,表达Gl 和G2的水平仍然根低, 看不出明显表达 的蛋自质条 带;

而在用 p G E X一4 T一1构 建的 G l 表达质粒 p T

7 6 G

1 诱导后 的SDS― P A G E凝胶上 明显可见一分子量纣为

1 0

8 k D表达 产物 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国病毒学第l2卷 带,但G2表达质粒 p T

7 6 G 2诱导后在 S D S ―P AG E凝 胶上 仍未 见明 显的表达 产物 , 表达产物SDS―P A G E结果见图9和 图1O.表达质粒 p T?

6 G1 ―1和pT76G2―1 诱导表达后的 S DS ―P AG E凝胶上也未见明显的预 期 表达 产物带,见图1l.篓图9pK76G1和pK7

6 G2表 达产 物SDS―P AG E 的结 果9TheS DS― P AGE e x pr e s s i o n p r o d u c t o i a

5 . m p K7

6 GI a n d p K7

6 G '

2( A Pr o c dnm. de c . u we i g h t s u md a r d~ B p KK22 3―

3 l n d u c t _ 衄;

C. p K76 G1 , No n - i n du c t i on;

D p K7

6 GI. I n du c t i o n ;

E.p K7 6G2,No n ― i nd u c t i o n F. p K7

6 G2 .

1 n d u e t i o n ) 图10pT76G1和pT76G2表 达产物SDS―PAGE的结果Fi g

1 0 Th e S DS ― P AGE o f ;

∞ p r o d u c t o f p l a s m ~ p T76 G1 a n d p T'

t

6 G2 ( A P r o t e i n ~ ] e c u ] a r we i g h t s t a n d a i q ;

B p GEX~T.

1 , I n d u c ti on ;

C . p '

] Wf G1 ,No n ― i n d uc t i o n;

D .p T?

6 GI . [ n d ~ t i o n ;

E. p T76 G2. No I I ― i n d u c ti o n;

F p T

7 6 G

2 ・ I n d u c t i o n ;

9 p T

7 6 N P . I n d u o r i o n )

3 表达 的蛋 白质免疫小鼠 6个表达 质粒诱导后的菌体裂解液都能刺激小 鼠产生抗汉滩病毒特异・ 陛抗体. 但 抗体 滴度无明显 差别 , 详细结果 见表 l 维普资讯 http://www.cqvip.com 第4期黄长形等 : 用 不同载体 在大脑杆菌中 表达 汉滩 病毒囊膜糖 蛋白 G1 和G232794k I ) D

4 3 k D. ^ B C D E } H 瓣:鬟|麴鹕'

讨论图11RT76GI一1 和pT76G'

2―1 裹选产物 S D S ― P A G E的结幕

1 1 Th e印s―PAGE o f p

0 f p I 瞄n 埘pT7

6 GI一1 a n d p T7

6 G 2―1( A- P r o t e i n mo l e ~ '

u l a r w咖l h t

5 t I m B. p ( ;

一4T 一1. I n du c t i o n;

C. p T'

/

6 GI一1,No n― i ~ i d u c t i o n;

D ~ T76 GI 一1.I n d u c t i o a;

E. p T7

6 G 2―1 , No n―i n d u c t l c ~;

F. p T7

6 G2―

1 . I n d u c t i o n ) 影响外源基因在大肠杆菌中表达水平的因素包括 : 载体( 启动子 ) 和宿主菌的选择, 培养条 件的控制, 外源蛋 白编码基因密码子及 mR N A一二级结构等口 】 .启动子是影响外源基因表达 水平的关键 因素 . 外源蛋白对启动子 有一定的选 择性. 虽然 目 前所用表达载体上的启动子都为 强启动子, 但一种外源 蛋白在含不同启动子的载体中表达水平不一致.基于这一点. 我们选择 了与 p B V