PDF《液相色谱柱 使用问题排查指南》

新柱柱效测试,为何塔板数明显偏低? n 确保系统状态正常,如有必要再冲洗一次.

n 柱效受系统死体积扩散影响.沃特世(Waters?)色谱柱出厂测试是在体积最小化的系统上进行,塔板数较高.通常自测如 能达到70%以上,就可以接受. n 色谱柱体积越小,系统死体积(管路、检测器流通池)对柱效的影响就越大.对于小内径色谱柱(2.1和3 mmid)、和/或短的 色谱柱(≤10cm),尽可能减少系统死体积(管路长度/内径、流通池),并仔细检查管路与色谱柱的连接.检测器采样频率 应设置为20 Hz. n 用什么条件和什么样品测试的?峰保留时间越短,越容易受系统死体积影响.建议调整流动相条件,使峰保留时间在10分钟 (常规HPLC系统)或5分钟(UHPLC系统). n 样品进样体积越大,样品溶剂会导致峰扩散.HPLC柱可进样1 ?L,UPLC柱可进样0.1 ?L. 新柱上机,基线一直不能平衡,怎么办? n 首先断开检测器,按照对色谱柱的高洗脱强度溶剂5倍柱体积或者重复5次梯度冲洗色谱柱,然后按照测试柱效的方法测试. n 无规律的噪音,可考虑是否有气泡进入检测池,沃特世仪器用户请拨打免费售后服务热线800(400)

820 2676,获得冲洗 检测池指导. n 规律性的上下波动基线,可考虑是否泵混合效率不足,在泵后增加mixing loop,具体请咨询仪器维修工程师. n 实验室内的环境条件是否会干扰到仪器,以及色谱柱柱温情况. n 如果基线缓慢上飘或下飘,检查流动相是否存在配制不均匀、或者在缓慢挥发的情况. n 更换同类型的旧柱情况会如何?有时需要对新色谱柱进行一定的老化(可以运行几次梯度方法). 新柱一进样峰就拖尾,是色谱柱已经坏了吗? n 检查系统状态正常,检查管路与色谱柱连接无死体积. n 对新色谱柱进行柱效测试,检查是柱效问题还是应用问题(可向我们索取柱效测试标准品或标准品配方). - 若柱效测试峰塔板数明显偏低,请参考问题1. - 若柱效测试结果正常,判断为应用问题. 请考虑:这根色谱柱是否适合这个应用项目?过去那根旧色谱柱在进行这个项目测试时,色谱柱是否已经被离子对条件或其 他改性条件用过? 新柱不能重现旧色谱柱谱图,是色谱柱的批次问题吗? n 新色谱柱是否需要老化或充分的活化平衡?旧色谱柱是否在测试项目以前经历过变性条件(如离子对试剂)?项目之前用过 不同批次色谱柱测试并能重现吗? n 如手头有可用的旧柱,请对同一个样品、同一系统、同一配制流动相进行平行比对(同一天或隔天),建议每根色谱柱上. 重复3次平行进样.如果两根色谱柱上的各自3针进样谱图均稳定重现(可完全重叠,没有增减),而两根色谱柱的谱图有所 差异(个别峰的增加/丢失/分离改变),可确认两柱有差异.可能该项目条件敏感,导致对色谱柱批次敏感("挑批次"). n 如有可能,优化分析方法,并用至少两根以上不同填料批次的色谱柱进行方法重现性检查. 新柱连续进样,保留时间不稳定,一直有漂移,怎么回事? n 色谱柱的平衡有没有充分,尤其是使用离子对试剂的情况下. n 流动相配制是否足够均匀,比如磷酸盐与乙腈需要剧烈震摇混合,超声混合不充分. n 流动相是否存在挥发性组分,导致缓慢变化. n 是否使用柱温箱,或者色谱柱是否暴露在温度变化较大的环境中(如空调风口等). n 亲水作用色谱柱(如XBridge? Amide柱,XBridge/Atlantis?/CORTECS? HILIC柱),需要活化步骤,以及较长时间的再平衡, 请询我们. n 进行柱效测试,连续进针,看保留时间是否漂移,确认仪器状态是不是稳定的. 液相色谱柱 使用问题排查指南 [ 常见提问与解答 ] Q1: A: Q2: A: Q3: A: Q4: A: Q5: A: 扫一扫,关注沃特世微信 ?2016 沃特世公司 中国印制