PDF《液相色谱柱 使用问题排查指南》

2016 年5月沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 北京:010 -

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820 2676 www.waters.com 新柱上机,其它峰都正常,但增加了杂质峰个数,或者时不时出现"鬼峰",是色谱柱有"流失"吗? n 样品不变,连续3针进样,检查"鬼峰"是否稳定存在且大小一致,如是,可能来自样品溶液(样品降解、样品瓶污染)都有 可能. n 连续2~3针空针,可以检查"鬼峰"是否来自流动相的污染,或是柱上残留(后者通常峰越来越小). n 连续进针时,峰的大小变化规律、以及峰保留/峰形的谱图,可以用于参考判断. n 最后注意样品过滤器膜材质,是否会造成吸附和/或溶出. 没进几针(或几百针),峰形就变差了,色谱柱坏得太快怎么办? n 是全部峰都变差,还是只是个别峰形变差?对于后者,通常提示柱并未坏 n 清洗过色谱柱吗?什么清洗条件?清洗后,是否有所恢复?如是,提示有样品污染(或流动相污染),在分析中加强清洗 步骤(或者用质量好的流动相). n 使用的流动相条件是什么?样品配制方法是什么?如果是对色谱柱有化学腐蚀性,考虑使用更耐用的色谱柱,或者加配 保护柱.如果是样品有组分吸附污染,加强样品处理过程,或者加配保护柱. n 是否伴随柱压升高?如果是,参见问题8. 没进几针(几百针),柱压就高了,为什么?怎么办? n 首先是压力突然就升高了还是逐渐升高的. n 若是突然高了,看下样品是不是不是澄清的,分段排查一下仪器看下哪里堵了. n 若是逐渐升高,如果不进样压力就不上升,那说明污染来自样品,色谱柱要好好清洗一下,同时加强分析过程中的柱 清洗.如果是不进样也能慢慢上升,提示流动相有微粒,特别注意: 1)流动相配制时是否需要加强过滤(注意要用合适且合格的滤膜);

2)水相流动相是否长期放置,容易长菌(特别是在天气 较热时,磷酸盐易长菌,建议当天新鲜配制,且连瓶更换);

3)检查系统背压、特别是检查水相通道的压力,如果压力明 显偏高,提示有长菌污染,需要对系统进行彻底清洗. n 排查压力升高位置,分段依次检查:系统压力、在线过滤器(如果有)、保护柱(如果有),如果压力(堵塞点)发生在在线 过滤器或保护柱上,通常色谱柱本身仍可使用.可通过柱效测试检查色谱柱性能状态(柱效、压力). 一直用得好好的色谱柱,过了一个周末(或者几天),就突然不好了,怎么回事? n 怎么"不好"?是峰形恶化?压力增加?还是其它问题?对前两者,可参见问题7和8. n 如涉及峰形或压力,有没有可能是仪器问题?或管路与色谱柱连接不好. n 上次使用完,是如何清洗和保存的? 特别注意,是否充分清除了流动相中的盐分.仪器上的全水相管路是否置换为有机 溶剂、或含有至少5%以上有机溶剂,以避免长菌. n 如峰形相对正常,但保留/峰面积变化:这个应用是否要求充分平衡色谱柱?样品稳定性如何? 这次购买的色谱柱没有之前购买的色谱柱使用时间长,不耐用. n 寿命缩短的表现是什么?峰形恶化的过程,是否伴随柱压升高?可参见问题8. n 样品、流动相条件、操作习惯等,是否与以前一致,具有可比性(特别是使用维护习惯)? n 流动相的水、溶剂、盐的来源是什么?特别注意检查空针时的梯度基线,本底峰提示是否存在流动相污染、存在杂质 量的多少.有些来源不合格的盐,甚至会导致柱寿命的急剧降低. 您可以联系我们获得柱效测试条件,第一次我们会提供标准品,之后按照我们的配制方案自行配制即可.若上述这些Q&A还 是不能解决您的问题,沃特世耗材部应用顾问会让您填写"液相色谱柱应用问题及疑似质量问题反馈表",随后会有资深工程师 根据您所填写的反馈表来跟进并解决问题. [ 常见提问与解答 ] Q6: A: Q7: A: Q8: A: Q9: A: Q10: A: