PDF《吴田双江古茶树与云南大叶种茶群体品种间的 ISSR 分析_吴田》

2 720 m 处,株高 16.8 m,基围 3.25 m, 胸围 3.1 m,树幅 13.7*10.6 m;

另外一棵根基 和株高都在

1 号大茶树之上的古茶树,因为这棵 茶树是在考察组对古茶山科考后才发现的,先前 就命名了

1 号大茶树,所以,便称它为 1+1 号137 第32 卷中南林业科技大学学报大茶树.近年来,虽然有不少报道是关于茶树亲 缘关系的研究,但鲜有探讨双江古茶树与云南大 叶群体品种间亲缘关系的的研究. 随着分子生物学的发展,基于 PCR 的分子标 记如 RAPD、AFLP 、SSR、ISSR 等,被广泛应用 于植物遗传研究 [1-2] .ISSR 标记是采用

17 ~

22 碱 基的重复锚定引物扩增重复序列之间的片段,操 作简单、重复性好、多态性丰富 [3] ,且一套 ISSR 引物可在多种作物中通用,利用率高,在遗传关 系研究方面的应用前景更广阔 [4] .用ISSR 标记进 行茶树进行分子鉴别的报道逐渐增多 [5-7,8] .本实 验采用 ISSR 技术探讨双江古茶树与云南大叶群体 品种间的亲缘关系,以在今后育种及分类工作中 在DNA 水平提供证据.

1 材料与方法 1.1 植物材料 样品主要采集自勐库、凤庆、勐海等

3 个茶区, 叶面积、叶形指数、叶脉数、叶片特点、叶片颜 色等特征详见表 1.表1中的名称大多根据采集地 命名, 如 勐库 为勐库群体栽培品种, 采集自勐库;

凤庆

1 、 凤庆

2 分别为采集自凤庆不同地 点的两份材料.古茶树

1 ~

4 均采自双江勐库镇大 雪山,其中 古茶树

2 为1号大茶树, 古茶树

4 为1+1 号大茶树,而 古茶树

1 和 古茶树

3 为1号大茶树附近、植株较为矮小的、形态特征略 有差异的茶树样品.古茶树

1、

2、3 和4即为本实 验所要探讨的双江古茶树.而 红毛茶 是当地认 为是 野茶 的一种资源,且有研究者认为其与双 江古茶树有一定的渊源,但目前还未见其进行详细 的分类鉴定的资料.样品选无病虫害的茶树嫩叶, 洗净后擦干,用液氮速冻,置于 -70℃冰箱备用. 1.2 主要试剂 CTAB 提取介质:200 mmol/L Tris-HCl(pH 值表1用于本研究的云南大叶种茶种质 ? Table

1 Yunnan big-leaf tea germplasm resources used in the present study 编号 名称 叶面积 */cm2 叶形指数 * 叶脉 */ 对 叶片特点 叶片颜色 采集地

1 勐库 65.7 2.6 11.7 轻革制化 深绿 勐库

2 样品 A*

3 样品 B*

4 古茶树

1 32.2 2.3 11.4 轻革制化 绿 勐库

5 古茶树

2 56.4 2.3 10.8 革制化 深绿 勐库

6 红毛茶

17 2.3

9 轻革制化 绿 勐库

7 古茶树

3 72.5 2.2 10.3 轻革制化 深绿 勐库

8 古茶树

4 35.7 2.3

12 软 浅绿 勐库

9 永德

1 68.9 1.9 10.0 革制化 深绿 永德

10 永德

2 116.0 1.7 9.6 软 深绿 永德

11 永德

3 109.7 2.1 11.8 软 深绿 永德

12 凤庆

1 171.9 2.4 12.6 革制化 深绿 凤庆

13 凤庆

2 62.1 2.1 11.2 革制化 深绿 凤庆

14 易武 55.1 2.4 10.4 革制化 亮绿 易武,勐海

15 勐海

1 50.4 2.1 12.4 革制化 亮绿 勐海

16 勐海

2 63.3 3.1 13.2 软绿勐海

17 勐海

3 50.7 2.1 12.0 软 亮绿 勐海 ? * 均为

3 片成熟叶片的平均值;

** 数据未列示,将用于其它研究. 8. 0),l00 mmol/L EDTA(pH 值8. 0),200 mmol/L NaCl;

CTAB 抽提缓冲液:100 mmol/L Tris-HCl (pH 值8. 0),20 mmol/L EDTA(pH 8. 0),350 mmol/L NaCl,3 % CTAB,2% β- 巯基乙醇;

SDS 提取介质:100mmol/L(pH8.0)Tris-HCl,50 mmol/ L EDTA (pH 值8.0),500 mmol/L NaCl.本实验所 使用的试剂均为国产分析纯. 吴田,等:双江古茶树与云南大叶茶种群体品种间的 ISSR 分析