PDF《临床组织样本》

5. 用PBST冲洗三遍,每遍10分钟. Protein Marker 孵育二抗 1. 将按比例用二抗稀释液稀释好的二抗放在容器中,放在常温摇床 上,孵育30分钟~1小时;

2. 将容器中的一抗收集起来,放在4℃或者-20℃冰箱保存;

3. 用PBST冲洗三遍,每遍10分钟;

4. 最后用PBS冲洗一遍,然后将PVDF膜浸泡在PBS中,等待显影或 者扫膜. 显影(化学发光) 1)将两种显色底物(ECL A&

ECL B)1: 1等体积混合(一般1ml/membrane). 2)将混合物覆盖在膜表面,1-2分钟, 摇晃使均匀. 3)用保鲜膜把膜包起来,放入夹板中. 4)在暗室中将X光片,覆盖在膜的上 面,夹好夹子,曝光1min. 5)显影、定影. 6)根据结果调整曝光时间和曝光区域, 得到最佳结果. 二抗是HRP偶 联的 须避光 显影(荧光) 二抗是荧光的 电化学 荧光 结果分析 软件:image J 灰度分析 Thank you! ........