PDF《重望生 堕童》

一c『第u卷 第l期1996年 3月中国病毒学VIROLOGI CA SI NI CA | 晦V0】l1 No l M a f

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6 一 株新的狂犬病重组痘苗病毒某些生物学性质的研究 塑/

2、/――――――――一~.

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/ ( 卫生部武 汉 生物 制 品研 究所, 武汉

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0 ) )々 、 z f \ 、 j / ~. , 提要 对 表达 狂犬 病毒 糖蛋 白的重 组痘 苗病 毒VVMl l KR G 株生 物 学性 质进行了研 究.该重组 病毒的特 点是 : (

1 ) 糖蛋白基因 插^到 痘苗 病毒 天坛 株基因组HindⅢ M 片段 中;

(2)启动子为痘 苗病毒天坛 株P11晚期 启 动子 ;

(

3 ) 不含 外源 I a c 基因. 该重 组病毒在CV一1细 胞和鸡胚细胞上繁 殖滴渡略 高于 另一株 重组 痘苗 病毒 vvTK1

1 K RG, 在鸡 胚细 胞 中繁殖 滴度第三天 达 到最 高.在CV- I 细胞 中 第二天 达到 最高 温 度稳 定性 与天 坛株相比没 有明显改 变.重组 病毒在家兔皮内的毒 力 比亲本株 ( 天坛 株)慨.间接 免疫荧 光和 We s t e r n b l o t 都证明了 狂犬病 毒糖蛋白有 良好 的表 达 .通 过Southernblot证实糖 蛋 白基 因准确 地插 入到 Hi n d n l M 片段 中 .重组 痘苗 病毒 启动 子 与部 分糖 蛋 白基 因克隆 到pGE M3 z f ( 一) 质粒上 . 对该 段DNA序 列分 析 表明 不会 产生 移码 和融台蛋白从而为该重 组病 毒的使 用提 供了明确 的 基因背 景 资料 . 关键词:斟糖蛋白'

重望生堕童'

孝痘苗病 毒作 为哺乳动物细胞基 固工 程表达载体, 近年 来被 广泛地利用 , 并if,成功地表 达了 多种 外源基因,由于 它的基因组容 量大,可在非必需区插入大量外源DNA. 因此,又是构建多价疫苗 的理 想载 体… .我 们为进一步研 究基 因工 程狂犬疫苗 , 构建了一株 表达 狂犬病 毒糖 蛋 白重组痘苗病 毒WMl l KR G.该病毒 主要特 点是 利用痘苗病 毒Pll晚 期启 动子 , 把 狂犬病 毒糖蛋 白基 因( R G 基因) 插入痘 苗病 毒天坛 株基 因组 Hi n dI I

1 M 片段 中 本实 验对该 重组病 毒生物 学性 质进 行 了研究 , 并在某些性 质上 与以前构 建的重组痘 苗病毒 VVTK1

1 K RG株作了 比较材料 与方 法l病毒 与质 粒重组痘苗病毒 VVM1 I KR G 抹、vv TK

1 I KRG 株(Re 基 因插 入TK区)由本 科室构建.痘苗 病毒 天 坛抹 ( TK ) 、 压粒 p

6 9 L a e S - 1由 中国静 { 防 医学 科学 院病 毒研 究所 提供在本 科 室长 期保 存.2抗体抗狂犬病 毒糖 蛋 白单克 隆抗 体 由本 科室 及美 国疾 病控 制 中心 ( C ~ X

3 ) 提供.辣 根过 氧化物酶(HRP ) 标记 羊抗 鼠单 克 隆抗 体购 自Sigma 公司3病毒滴 定非洲绿猴肾细 胞(CV.

1 ) 接种至24孔 板形成单层后,病毒连续1O倍 稀释.每个稀释度取03m1 . 吸附

1 h后加维 持液置37 C,

4 8 h后结晶 紫染 色, 根据 卒斑 数计 算病 毒滴 度(PFU/ m1 )

4 重组病 毒 的繁 殖特 性和 温 度的稳 定性用细胞 空斑 滴 定法 , 计算出不 同时间和 不 同细 胞 中重 组病 毒 的增 殖情 况,及在 不 同温 度下重 组病 毒 的稳 定性

5 家兔 皮 内接种 的毒 力试 验将重组 病毒和 痘苗 病 毒天 坛株分别 作lO倍 系列稀释,各用01ml 皮内接种 家兔 , 背部左 侧接 种 痘苗病 毒 天坛 株.右侧 接种 重组 痘苗病 毒.第4天 反应 高 峰时 , 测 皮肤 红肿的直径 .

6 间 接免疫 荧 光和 We s t e r n b l o t 试验CV.