PPT《TOCSY》

或者在?m期间插入一个180度脉冲,此时纵向磁化仅仅变号,而零量子项的有效进动时间与180度脉冲的位置有关,若180度脉冲的位置随t1随机变化,也可抑制零量子峰.由于NOESY是同相谱,一般用相移60-90度的正弦窗函数. NOESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 D 应用及其他原则上,距离小于5埃的两个氢核都能产生可观测的NOE交叉峰.NOESY既用于序列证认,也用于获得距离约束.水峰预饱和往往抑制水峰附近的信号,也使相关的交叉峰强度变化,这时可采用其他手段,如jump-and-return,或用WATERGATE梯度场脉冲作为观测序列. NOESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 NOESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 NOESY 生物大分子波谱学原理吴季辉

第六章 同核核磁实验方法 COSY型实验 多量子谱 TOCSYNOESY ROESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 ROESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 由于实验室坐标系中的交叉弛豫速率在小分子为正,在大分子为负,在中间大小的分子如小肽接近零,因此小肽的NOE交叉峰非常弱乃至消失.在这种情况下要得到残基间的关联信息可以利用ROESY实验.ROESY实验检测旋转坐标系中的交叉弛豫速率,同NOE不同,ROE在所有相关时间下均为正,因此即使NOE峰消失,ROE峰仍能产生. ROESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 ROESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 ROESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 ROESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 ROESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 C 实验及处理由于自旋锁定期间会产生TOCSY型的信号传递,射频场功率要相当低,一般取2-5kHz,一方面为了抑制TOCSY型峰,另一方面为了避免样品发热及保护仪器,因为ROESY混合时间较TOCSY长.同NOESY相比,混合时间可以短一些,因ROE速率为NOE速率的二倍.采样点数及适用的窗函数等与NOESY类似. ROESY 生物大分子波谱学原理吴季辉 D 应用主要用于分子量较小的多肽,较大蛋白质的其他研究也可用ROESY,因自旋扩散对ROESY的影响相对小一些,此外在ROESY中交叉弛豫产生的交叉峰为负峰,而化学交换产生的交叉峰呈正峰,因而可用于相关的研究,其他一些类似的旋转坐标系中的核磁实验可用于研究蛋白质分子的整体运动.但在定量上,这类实验受频偏及其他因素的影响较大. 同核相关谱谱形总结 生物大分子波谱学原理吴季辉 以下列出本节讨论过的所有 (AX体系) 同核化学位移相关谱的谱形.虽然每组共振峰都有4个峰,但往往只有在DQF-COSY谱中能看到4个峰.对于本节已讨论过的其它几个2D谱,如幅度COSY,TOCSY,NOESY和ROESY,由于分辩率较低,这4个共振峰往往合并成一个峰.幅度COSY由于是幅度谱,因而是纯吸收的正峰,不过其共振峰较相敏谱的来得粗一些,不能调相. 同核相关谱谱形总结 生物大分子波谱学原理吴季辉 幅度COSY由于是幅度谱,因而是纯吸收的正峰,不过其共振峰较相敏谱的来得粗一些,不能调相. 对于相敏COSY和DQF-COSY,由于是通过反相分量产生相干转移而建立起核与核之间的联系 (由交叉峰表现)的,因此其交叉峰是正、负交替的. 对于由反相分量而建立起的联系的谱,如幅度COSY,相敏COSY,DQF-COSY都是用正弦钟窗函数进行处理,以便加强交叉峰,削弱对角峰. 同核相关谱谱形总结 生物大分子波谱学原理吴季辉 对于TOCSY,NOESY和ROESY由于是通过同相分量而建立起核与核之间的联系的,因此其交叉峰是同相的. 对于由同相分量而建立起联系的谱,如TOCSY,NOESY和ROESY都用余弦窗函数进行处理,以便加强交叉峰而削弱对角峰. 同核相关谱实验设置 生物大分子波谱学原理吴季辉 同核相关实验的设置如下:幅度COSY:采集256个FID, 零填充后谱由1K?1K个实数点组成;