PPT《高压液相技术》

而气相色谱并不可能的. ③ 液相色谱通常在室温下操作,较低的温度,一般有利于色谱分离条件的选择.(3)由于液体的扩散性比气体的小105倍,因此,溶质在液相中的传质速率慢,柱外效应就显得特别重要;

而在气相色谱中,柱外区域扩张可以忽略不计.(4)液相色谱中制备样品简单,回收样品也比较容易,而且回收是定量的,适合于大量制备.但液相色谱尚缺乏通用的检测器,仪器比较复杂,价格昂贵.在实际应用中,这两种色谱技术是互相补充的.

第一节 概述综上所述,高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广等优点.该法已成为现代分析技术的重要手段之一,目前在化学、化工、医药、生化、环保、农业等科学领域获得广泛的应用.

第二节 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成(图14-2)分析前,选择适当的色谱柱和流动相,开泵,冲洗柱子,待柱子达到平衡而且基线平直后,用微量注射器把样品注入进样口,流动相把试样带入色谱柱进行分离,分离后的组分依次流入检测器的流通池,最后和洗脱液一起排入流出物收集器.当有样品组分流过流通池时,检测器把组分浓度转变成电信号,经过放大,用记录器记录下来就得到色谱图.色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据.

一、高压输液系统

第二节 高效液相色谱仪 高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表 等组成. 1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成,容量为1到2 L,用来贮存足够数量、符合要求的流动相. 2.高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一,其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统,使样品在色谱柱中完成分离过程.由于液相色谱仪所用色谱柱径较细,所填固定相粒度很小,因此,对流动相的阻力较大,为了使流动相能较快地流过

第二节 高效液相色谱仪 色谱柱,就需要高压泵注入流动相. 对泵的要求:输出压力高、流量范围大、流量恒定、无脉动,流量精度和重复性为0.5%左右.此外,还应耐腐蚀,密封性好. 高压输液泵,按其性质可分为恒压泵和恒流泵两大类. 恒流泵是能给出恒定流量的泵,其流量与流动相粘度和柱渗透无关. 恒压泵是保持输出压力恒定,而流量随外界阻力变化而变化,如果系统阻力不发生变化,恒压泵就能提供恒定的流量.

第二节 高效液相色谱仪 3. 梯度洗脱装置 梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例,从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化,达到提高分离效果,缩短分析时间的目的. 梯度洗脱装置分为两类: 一类是外梯度装置(又称低压梯度),流动相在常温常压下混合,用高压泵压至柱系统,仅需一台泵即可. 另一类是内梯度装置(又称高压梯度),将两种溶剂分别用泵增压后,按电器部件设置的程序,注入梯度混合室混

第二节 高效液相色谱仪 合,再输至柱系统. 梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动相的强度,来调整混合样品中各组分的k值,使所有谱带都以最佳平均k值通过色谱柱.它在液相色谱中所起的作用相当于气相色谱中的程序升温,所不同的是,在梯度洗脱中溶质k值的变化是通过溶质的极性、pH值和离子强度来实现的,而不是借改变温度(温度程序)来达到.