PDF《施双双 , 钟彦伟 ,》

第16卷

3 期2001年9月中国病毒学VⅡ砷

0 G J C A 日NI c A

1 6 (

3 ) :

2 2

0 ―2

9 -

3 S e p t e mb e r

2 0

0 1 丙型肝炎病毒包膜蛋白 E

2 可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达 成军 , 施双双 , 钟彦伟 , 夏小兵 , 王刚, 王琳 , 刘妍 , 陈菊梅 ( 解放军第三0二医院传染府研究所基 因治疗研 究中心 , 北京

1 0

0 0

3 9 ) F a p r ~ o n o f S o l u b l e Hu ma n S e Fv Ag a i n s t En v e l o p e P r o t e i n E2 o f He p a t i t i s C Vi r u s An t i g e n i n E.

c o l i . C HE N G J u n , S m S h ~n g ― s h ~n g . Z HO NG Y a h ― w e i , X 【 A X i a o ― b i n g WA NG G a n g , WA NG L i n , L I U Y a h , C HE N J u ・ me i ( C o , h e r h o w, y盈,删缸 B / s e a s e s ,

3 0 2皿甲 o fP / A, &

慨100039,C/waa)Ahslraet:ToecmstxuetexpressiveveeR)/ forhumanSeFvagairIsIE2proteinofhepatitisCrims( H C V ― E

2 一scFv),andsolubleHCV・E2・ScFvinE. c o i l J M1

0 9 , u

8 i I

1 g p h a g e d i s p l a y t e c h n i q u e , t h e r e c o m b i n a n t p h a g e sw e m I m b y r e e mn b i n a n t E

2 a n t i g e n w h i c h w 舾coatedinami e r o f i t e r p l a t e , a f t e r f i v e r o u n d s o f b i o p a n n i n g .

4 6 d o r m s w e I e i d e n t i f i e d s p e c i f i c t o E

2 a n t i g e n.

7 5

0 b p f r a g me n t c o u l d b e r e l e a s e d f r o m t h e p l a s ― mi d o f p a s i t i ~ e p h a g e c o l o n e s . a n d t he s e q u e n l e a n a l y s i s i n d i c a t e d t h a t w e h a v e g o t t he S c F v B N A f r a g m e n t . A n d t l l e l l D N A f r a g me n t w a s i n s e r t e d i n t o e x p r e s s i v e V e c t o r

0 '

A B

5 E a n d E. c o l h a st J M1

0 9 w 舾traHs―formedandinducedbyltq'

G. T h e s p e c i f i c i t y o f S c F v i n t h e c u l t u r eⅡ l e d i m w a s e v a l u a t e d b y e n ~ q l a e ・ l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y ( E L I S A ) . T h e m o l e cu l a r w e i g h t o f e x p r e s s e d H C V ― E

2 一ScFvis28kDbySDS―polyacrymidegelde c t r o p h o r e s i s ( P A G E ) . T he e x p r e s s e d H C V - E

2 - S e F v w i l l b e u s e f u l i n t he i m m m l o h i s t o c h e m i e a l s t u d y o f l i v e rt i s s u e a n d g e n et he r a p y a g a i n s t H C V i n f e e f i i o n. K e y w o r d s : H C V;

E

2 ;

S i r ~e c } m i n F v a nt i b o d y ;

E x p r e s s i o n 摘要:利用分 子生 物学技术 , 构建表达丙型肝炎病毒 ( H C V) 包膜蛋 白卫的人源单链 可变 区抗体 ( s c F v ) 的原 核表达 载体 , 并在太肠杆 菌JM1

0 9中表达可溶性 的HCV-E2一scFv.以重组 的HCVE2蛋 白为包 被抗原 , 利用 噬苗体抗 体库 的表面展示技 术,筛选到含有 H C V - E

2 - S c F v基因的噬苗体克 隆. 从噬菌体抗体 阳性克隆 中提取 质粒 , 经^lm】/￡I酶切鉴定后 , 该SeFv基因由750bp组成 , 将其 亚克 隆到 ~ I T A B

5 E载体中, 转 化太肠杆 菌.UMI ~, 提 取质 粒进 行DNA序列测定 , 符合 S c F v的基因结 构特点 .I P I G诱导 转化的大脑杆 苗JM1

0 9 , 在其培养上 清中获得 了可 溶性 H C V 单链 可变 区抗体的表达.酶联 免疫 吸附法( ⅡJ s A ) 证实表 达的 H C V - E

2 一ScFv具有 与重组 H C V E 2蛋 白的反应 活 性和特异性 , 对转化 的J/vll09大脑杆菌上清中表述 的HCV.E2-ScFv进行聚丙烯酰 胺凝胶 电泳 ( P A G E ) , 证实表 达的 H C V - E

2 - s c 的分子量为