PDF《施双双 , 钟彦伟 ,》

2 h后加入浓缩的 噬菌体 , 以0.1mol/L三 乙胺洗 脱 已吸 附在平 皿上的噬菌体, 然后用

1 m o L / L~ l f i s ( p I -

1 7 .

4 ) 中和 , 再感染对 数生长期的大肠杆菌 T , 培养扩增 使表达单 链可 变区抗体 的噬菌粒得到富集.继续重复

5 次上述 吸附、 洗脱、 扩增 过程 .将最后一轮筛选得 到的重组菌涂平皿 , 从中挑选

3 6株单 克隆菌株 , 置2*TY(氨苄青霉素

1 0

0 r L ) 中, 将加入辅助噬菌 体侵染后的培 养上清液用于酶 联 免疫 吸附法(EI监A ) 检测.对吸光 度(A值 ) 较高 的克隆重 复ELISA检测过程 , 并进行与牛血清 白蛋 白( B S A) 的交 叉反应 实验.对筛 选得到的阳性 克隆 菌株 按照Wi z a r d质粒 D N A纯化试剂盒 方法提取 质粒, 进行 N c o L / N o t l 酶切和 D N A序列测定.

1 .

3 E 2单链抗体表达载体 p C A N T A B S E的构建 由大肠杆 菌.E2.ScFv提 取质粒 p H E N I . E

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