PDF《施双双 , 钟彦伟 ,》

2 8 k n .为应用 H C V . E

2 . S c F v 进行肝组织免疫组织化学和细胞 内免疫基 因治疗研究 奠定 了 基础 . '

关键词 : 丙型肝 炎病毒 ;

包膜蛋 白;

单链 可变 区抗体 ;

表达 中国分类 号: R

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5 文献标示码 : A 文章编号 :

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0 3 -

5 1

2 5 (

2 0

0 1 ) 唧o4收稿 日期:.200O-07.17,謦回日期 :

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1 2 ・ 基金项 目: 国家 自然科学基金资助项 目(

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3 0 ) 作者简介: 成军(

1 9 一),男, 山东省高青县籍, 剐教授. 博士, 主要研究方向为传染病的基因 疗. 维普资讯 http://www.cqvip.com 第3期成军等 : 丙 型肝炎病毒包膜蛋 白E2可溶性单链 可变 区抗 体在 大肠杆菌中的表达 丙型肝炎病毒 ( H c v) 感染的抗病毒治疗 , 目前 除了部分病人对重组干扰素 a ( Ⅱ ) 具有一定的治 疗反应以外 , 还没有更为确切的抗病毒治疗方法…. 从抗人免疫缺陷病毒.

1 ( H r v -

1 ) 治疗研 究进展 中可 以看 出,利用基 因 工程 人源 化单 链可变区抗体 ( S c F v ) 的细胞 内表达进行细胞内免疫 的基因治疗 , 可发挥一定 的抗病毒治疗作用_

2 J .H C V髓是HCV包膜糖蛋 白的重要组成部分 , 近年来 的研究表 明, H C V g

2 蛋 白与靶 细胞膜上 的CD81分子之间的结 合,可能是 H C V感染靶细胞的重要机制_

3 '

4 .H C V 蛋 白分子结构中的高变 区( m喂) 是HCV诱发 中 和性抗体 的重要抗原结构域 , 因而 HL N E 2蛋白 H V R 区的变异 , 与HCV的免疫逃逸机 制和形成慢性感染 的机制有关 J .除此之外 , 不同结构的 H C V E 2蛋 白与干扰素诱导 的抗 病毒蛋 白, 如 双链 R N A激酶 P I C R等结合形成二聚体形式 , 影响 H C V感染者对干 扰素的疗效 ] .因而推测寻找 H C V E 2蛋 白的抑制 剂可能是一个探索抗 H C V治疗方法 的重要研究方 向.单克隆抗体虽然具有识别和结合病毒抗原的特 异性 , 但其 鼠源蛋 白的抗原性以及具有较大分子量 , 难以进人病毒感染 的细胞 , 因而很难用于细胞 内感 染的抗病毒 的治疗.S c F v 是具有抗原结合 位点 的 最小抗体片段n I

8 ] , 由连接肽把抗体重链可 变区和 轻链可变区连接起来 , 由于没有 F c 片段 , 免疫原性 小,能利用基因工程技术进行大量生产等特点, 具有 较好 的应用前景.我们利用噬菌体抗体库筛选表达 了人源 H C V . E

2 . S c F v , 并对其免疫活性和特异性进 行了鉴定 , 为进行抗 H C V的细胞 内免疫的基因治疗 研究奠定了基础.

1 材料与方法

1 .

1 材翱 H C V E 2抗原为大肠杆菌表达的全长重组纯化 抗原蛋 白, 纯度在

9 5 %以上, 购于美 国V i r c ~ s t a t 公司 ;

人噬菌体抗体文库为轻链可变区和重链可变区经甘 氨酸接头 ( G l y a S e r ) 连接 的抗体文库【 .Wi z a r d D N A质粒提取纯化试剂盒 购于美 国Promega公司;

D N A质粒回收试剂盒购于美国 B

1 0

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1 公司.酶标 羊抗鼠 E t a g k , G 抗体购于瑞典 P h a i r a a c i a 公司;

大肠 杆菌 J M1

0 9 为本研究中心保藏菌株.

1 2 特异性 H C V E 2人源单链可变 区噬菌体抗体 的筛选与鉴定 将单链可变区噬菌体抗体库扩增活化, 浓缩噬 菌体.用HCVE2抗原(

8 0 g / I n L ) 包被 N u n c培养 板,包被液 为0.05mol/LNaHCO,,

pI-I9.6缓 冲液 , 以2%小牛血清蛋白( B S A )

3 7 ~ C封闭