PDF《活细胞超灵敏结构光超高分辨率显微镜》

2 目前超高分辨率显微镜存在的问题 尽管超高分辨率成像技术已经获得诺贝尔化学 奖, 所有的显微镜公司也都有相应的商业超高分辨 率显微镜系统, 实际上生物医学研究应用超高分辨 率显微镜解决的科学问题仍然有限.主要的原因是 更高的空间分辨率意味着需要荧光探针发出更多的 光子.由于活细胞实验中最常用的遗传编码的荧光 蛋白被漂白前发出的总光子数有限, 因此限制了它 们在超高分辨率显微成像中的应用.绝大多数的超 高分辨率成像实验应用抗体和化学分子探针和量子 点, 只能应用在死的细胞样本中.因此, 应用这些超 高分辨率显微镜, 一方面不能够得到活细胞信息, 另 一方面又并不能得到比同样是应用在死细胞上的电 子显微镜更高的分辨率, 故其应用范围有限. 有一些实验室发展了特殊的超高分辨率显微镜 设备, 实现活细胞成像.但是, 即使是可以在活细胞 上成像, 由于需要很强的激发光来得到尽量多的激 发光子, 而荧光分子单位时间内发出的光子数有限, 因此活细胞成像的时间分辨率很低.另一方面, 强 激发光的强度也会进一步增加荧光蛋白的光漂白, 产生光毒性, 使得细胞凋亡[

1 4] .因此, 在活细胞上 长时间连续超高分辨率成像似乎是不可........