PDF《黑果枸杞花青素的制备与纯化研究》

UV-2600 紫外可见分光光度计 (岛津企业管理有限公司);

THZ-82 恒温振荡器(国华企业);

Z 型层析柱(Φ1.6*40 cm, 上海精科实业有限公司). 2.3 实验方法 2.3.1 黑果枸杞花青素的制备工艺流程 将干燥粉碎后的黑果枸杞粉末用石油醚脱脂, 采用 乙醇作为溶剂进行花青素的提取, 将提取液离心并取出上 清液进行蒸发浓缩, 采用大孔树脂对花青素提取液进行纯 化后, 收集洗脱液进行冷冻干燥得黑果枸杞花青素粉末. 黑果枸杞花青素的制备工艺流程见图 1. 2.3.2 黑果枸杞花青素的含量测定 花青素的定量分析常采用 pH 示差法[13] , 本研究选择 pH 为1.0 和4.5 的缓冲液测定花色苷的吸光值. 按1:10 (g/mL)的比例将黑果枸杞粉末加入到石油醚 中, 浸泡

1 h 后, 于50 ℃水浴加热回流

2 h, 过滤, 干燥滤 渣, 备用. 以矢车菊素-3-葡萄糖苷作为花色苷标准, 测定波长 为510 nm, 测得的总花色苷含量以矢车菊素-3-葡萄糖苷 的含量表示.样品分别用 pH1.0 的盐酸-氯化钾缓冲液和 pH4.5 的醋酸-醋酸钠缓冲液稀释, 平衡

90 min 后在最大吸 收波长(510 nm)处测定二者的吸光值.用700 nm 处的吸光 值做模糊校正[14] .计算公式如下: A=(A510-A700)pH1.0-(A510-A700)pH4.5 黑果枸杞中的总花色苷含量(mg/100g) C=

100 ? ? ? ? ? ? A MW DF V L M ? 上式中, A 为吸光值, MW 为花色苷的分子量(449.2 g/mol), DF 为稀释倍数, V 为提取液体积(mL), ε 为摩尔消光系数 (29600 L/mol・cm), L 为光路长度(cm), M 为取样量(g), C 为 测试样品花青素浓度.

3734 食品安全质量检测学报 第7卷图1黑果枸杞花青素的制备工艺流程 Fig.

1 Preparation process of anthocyanin in Lycium rethenicum Murr 2.3.3 花青素提取单因素实验 (1)乙醇浓度对花青素提取效果的影响 准确称取 0.5 g 黑果枸杞干粉

5 份, 浸于

20 mL 浓度 分别为 55%、65%、75%、85%和95%的乙醇(用盐酸调节 pH 值为 3.0, 以下提取液 pH 值均为 3.0)中, 在50 ℃下浸 提1h;

冷却至室温后过滤、稀释, 使各提取液中乙醇浓 度皆为 55%;

将残渣用 pH3.0 的55%乙醇溶液洗涤两次, 滤液定容至

50 mL.取1mL 上述提取液分别用 pH1.0 的 盐酸-氯化钾缓冲液和 pH4.5 的醋酸-醋酸钠缓冲液稀释, 平衡

90 min 后测定花色苷含量, 每个乙醇浓度的实验均重 复3次. (2)浸提料液比对花青素提取效果的影响 准确称取 0.5 g 的黑果枸杞干粉

5 份, 与pH3.0 的75% 乙醇按料液比 1:

10、1:

20、1:

30、1:40 和1:50(g/mL)混合. 在50 ℃下浸提

1 h, 冷却至室温后过滤, 定容至

50 mL. 取1mL 上述提取液测定花色苷含量, 测定方法同上, 每个料 液比的实验均重复

3 次. (3)浸提时间对花青素提取效果的影响 准确称取 0.5 g 黑果枸杞干粉

5 份, 分别装于

25 mL 具塞试管中, 然后各加入

20 mL pH3.0 的75%乙醇溶液, 置于恒温水浴锅中, 在50 ℃下分别浸提

1、

2、

3、4 及5h, 冷却至室温后过滤, 定容至

50 mL. 取1mL 上述提取液测 定花色苷含量, 测定方法同上, 每个浸提时间的实验均重 复3次. (4)浸提温度的选择 准确称取 0.5 g 黑果枸杞干粉

5 份, 分别装于

25 mL 具塞试管中, 然后各加入

20 mL pH3.0 的75%乙醇溶液, 置于恒温水浴锅中, 分别在

30、

40、

50、60 和70 ℃下浸 提1h, 冷却至室温后过滤, 定容至

50 mL.取1mL 上述 提取液测定计算花色苷含量, 测定方法同上, 每个浸提温 度的实验均重复