PDF《免疫组化（Immunohistochemistry）实验指南》

1 上海纽普生物科技有限公司 公司网站:http://www.

novoprolabs.com 免疫组化(Immunohistochemistry)实验指南 ? 免疫组化的定义和分类 ? 几种常见免疫组化方法简介 ? 免疫组化的实验步骤剖析 ? 酶免疫组化主要步骤剖析 ? 免疫荧光方法中主要步骤剖析 ? 免疫组化常见问题解答

2 上海纽普生物科技有限公司 公司网站:http://www.novoprolabs.com 免疫组化的定义和分类

1、 定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定 量研究的技术称为免疫组织化学(IHC)或者免疫细胞化学(ICC) .免疫组化具有特异性强、灵敏度高、定位准确等 特点.

2、分类 1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶) 、铁蛋白、胶体 金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等. 2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法) .与直接法相比,间接法的灵敏度 提高了许多. 3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法;

亲和连接,如卵白素-生物素-过氧 化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中 SP 法是比较常用的方法;

聚 合物链接,如即用型二步法,此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测. 几种常见免疫组化方法简介

1、免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术.它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检 查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定 波长的荧光, 从而可确定组织中某种抗原的定位, 进而还可进行定量分析. 由于免疫荧光技术特异性强、 灵敏度高、 快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广.

2、免疫酶标方法 免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60 年代发展起来的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然 后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各 种抗原成分进行定位研究.免疫酶标技术是目前最常用的技术. 本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是:定位准确,对比度好,染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等. 免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种标记方法,且随着方法的不断改进和创新,其特异性和灵敏度都 在不断提高,使用也越来越方便.目前在病理诊断中广为使用的有 ABC 法、SP 三步法、即用型二步法检测系统等.

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3、免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物.胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附 蛋白,对蛋白的生物学活性则没有明显的影响.因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的 分子(如葡萄球菌 A 蛋白)等作为探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究.由于胶体金有 不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究. 由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察.如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察. 免疫组化的实验步骤剖析 酶免疫组化主要步骤剖析 1)标本固定:固定的目的是①防止标本从玻片上脱落;