PDF《木犀草素下调AEG-1和MMP-2的表达对血管生成和乳腺癌细》

MMP-2;

MCF-7;

chick chorioallantoic membrane 研究论文 生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2013, 65(5): 513C518

514 乳腺癌是全球女性第一大恶性肿瘤,其发病率 呈逐年上升,且发病年龄趋于年轻化趋势,目前分 子靶向药物是用于肿瘤治疗的主要途径 [1,2] .研究 者认为,药物的抗肿瘤作用机制与抑制肿瘤细胞增 殖、诱导肿瘤细胞凋亡、阻遏细胞周期、抑制癌细 胞组织中血管新生和肿瘤转移侵袭等有关 [3] .肿瘤 细胞的转移侵袭是乳腺癌死亡率和复发率增加的主 要原因之一,而肿瘤的增殖和转移侵袭都依赖于新 生血管的生成.因此,获得有效地抑制肿瘤细胞血 管生成和抑制肿瘤生长、转移侵袭的药物,成为治 疗乳腺癌的有效途径之一 [4] .目前关于药物抑制肿 瘤细胞血管生成的研究,已经取得了一些进展.有 研究结果显示,雷公藤红素、人参皂苷 Rg

3、苦参 素等可以阻滞肿瘤血管的形成,从而抑制肿瘤的生 长和转移 [5,6] .木犀草素 (luteolin) 是从天然药物、 蔬菜果实中分离得到的一种天然无毒的黄酮类化合 物[7] .已有研究表明, 木犀草素能够抑制胃癌、 肝癌、 结直肠癌、前列腺癌和乳腺癌等细胞的增殖,表现 出较强的活性 [8C12] .目前,关于木犀草素对新生血 管生成和乳腺癌细胞的侵袭性作用机制的研究,国 内外尚未见报道.本研究以人乳腺癌 MCF-7 细胞 为实验材料,通过木犀草素作用后,检测新生血管 生成、 乳腺癌细胞侵袭性、 星形胶质细胞升高基因 -1 (astrocyte elevated gene-1, AEG-1) 蛋白、基质金属 蛋白酶 -2 (matrix metalloproteinase-2, MMP-2) 蛋白 的表达等情况,以探讨木犀草素对新生血管生成和 乳腺癌细胞侵袭性的作用机制.

1 材料和方法 1.1 材料 人乳腺癌细胞株 MCF-7 由中国医学科 学院基础医学研究所细胞中心提供.木犀草素标准 品,纯度 ≥98%,购自大连诺威信生物有限公司. 鸡胚购自大连韩伟养鸡场.新生牛血清和 RPMI-

1640 培养基购自 GIBCO 公司.胰蛋白酶、二甲基 亚砜(DMSO)、 四甲基偶氮唑盐(MTT) 均购自Sigma 公司.鼠Bcl-2 单克隆抗体、鼠AEG-1 多克 隆抗体、 鼠MMP-2 单克隆抗体、 β-actin 单克隆抗体、 羊抗鼠 IgG-HRP 和羊抗兔 IgG-HRP 均购自 Santa Cruz Biotechnology公司. 其余试剂均为国产分析纯. 1.2 方法 1.2.1 木犀草素对 MCF-7 细胞生长的影响 取对 数生长期的 MCF-7 细胞,制备单细胞悬液,以每 孔200 μL (4 *

103 个/孔)接种于

96 孔培养板,待 细胞贴壁后,加入终浓度为

20、40 和60 ?mol/L 的 木犀草素,对照组加入 1‰ DMSO.继续培养

24 h 和48 h.按参考文献 [13] 方法用酶标仪测定

490 nm 的吸光度值并计算药物对细胞生长的抑制率.实验 重复三次, 取平均值. 抑制率 = [1 C (OD实验组 ? OD空白组)/ (OD对照组 ? OD空白组 )] * 100%. 1.2.2 木犀草素对鸡胚绒毛尿囊膜 (chick chorioal- lantoic membrane, CAM) 模型新生血管生成的影响

6 日龄鸡胚用

1 ‰ 新洁尔灭 (38~42 ℃ ) 浸洗擦 干,钝头朝上,倾斜 45° 放入

37 ℃、相对湿度为 60%~70% 的恒温培养箱中培养

24 h.将鸡胚随机 分为四组,每组 4~5 枚,在超净工作台内,用75% 酒精消毒后,在距胚头

1 cm 处开窗,滴加一滴生 理盐水,显现出 CAM 血管,当CAM 与壳膜分离 后制成假气室.将玻璃纤维滤纸载体放于两条前卵 黄静脉之间的相对无血管区,各组分别滴入