PDF《木犀草素下调AEG-1和MMP-2的表达对血管生成和乳腺癌细》

30 μL 的

40、60 和80 μmol/L 木犀草素,对照组加入

30 μL 生理盐水,然后用无菌胶带封闭,放到培养箱 中培养

24 h,拍照观察. 1.2.3 木犀草素对 MCF-7 细胞侵袭性的影响 取 对数生长期的 MCF-7 细胞

1 mL (5 *

104 个细胞 / 孔),接种于

24 孔板中,待培养到形成单层细胞后, 用无菌枪头沿孔板底部中央水平划一道痕迹,用PBS 清洗划痕区域,弃去 PBS,反复三次,将刮掉 的细胞冲洗干净,然后每孔加入无血清 RMPI

1640 培养基和不同浓度木犀草素 (

0、

20、

40 和60 μmol/L). 分别于

0、

24、48 h 时在倒置显微镜下摄像.测量 划痕宽度,计算迁移率.迁移率 = ( 原划痕宽度 ? 现在划痕宽度)/原划痕宽度 * 100%. 实验重复三次. 1.2.4 木犀草素对 MCF-7 细胞中 Bcl-

2、AEG-1 和MMP-2蛋白表达的影响 取对数生长期的MCF-7 细胞,制备成 2.5 *

105 个/mL 细胞悬液,每孔

2 mL 接种于

6 孔板中,待细胞贴壁后,加入不同浓 度木犀草素, 使其终浓度为

0、

20、

40 和60 μmol/L, 继续培养

48 h,然后用细胞裂解液裂解不同处理组 细胞,收集细胞总蛋白,Bradford 法定量后按参考 文献 [14] 方法进行 Western blot.用凝胶成像系统对 胶片扫描记录相应条带的透射光积分光密度值, β-actin 为内参. 1.2.5 统计学分析 采用 SPSS13.0 和Excel XP 软 件对数据进行差异显著性 t 检验,P <

0.05 表示差 异有统计学显著性.实验组和对照组的相关数值均 用means ± SD 表示. 姜 英等:木犀草素下调AEG-1和MMP-2的表达对血管生成和MCF-7细胞侵袭性的抑制作用

515 2 结果 2.1 木犀草素对MCF-7细胞生长抑制作用 木犀草素对 MCF-7 细胞的生长具有一定的抑 制作用,呈现明显的时间和剂量依赖关系 ( 表1). 与对照组相比,60 μmol/L 的木犀草素作用 MCF-7 细胞

48 h,其对 MCF-7 细胞的抑制率为 (44.51 ± 1.52)% (P <

0.01).结果显示木犀草素可显著抑制 MCF-7 细胞增殖. 2.2 木犀草素对MCF-7细胞中Bcl-2蛋白表达影响 随着木犀草素浓度的增加,MCF-7 细胞 Bcl-2 蛋白表达量逐渐降低 ( 图1).其中

60 μmol/L 的木 犀草素组作用细胞

48 h 后,与对照组相比,MCF-7 细胞的 Bcl-2 蛋白表达下降了 (76.16 ± 2.01)% (P <

0.05).结果显示木犀草素能有效抑制 MCF-7 细胞 Bcl-2 蛋白的表达. 2.3 木犀草素对鸡胚新生血管生成的影响 对照组的 CAM 血管丰富且生长良好,主血管 长势旺盛.当40 和60 μmol/L 木犀草素处理 CAM

24 h 后,血管密度降低,管径变细.当木犀草素浓 度达到

80 μmol/L 时, CAM 出现了血管壁部分溶解, 血管分支多处断开, 分布零乱, 血管颜色变浅 ( 图2). 结果显示木犀草素对 CAM 中血管新生有明显抑制 作用. 2.4 木犀草素对MCF-7细胞侵袭性的影响 木犀草素可显著抑制 MCF-7 细胞的侵袭性作 用,且随着浓度的增加和作用时间的延长,其抑制 作用逐渐增强,呈剂量和时间依赖性 ( 图3).与对 照组相比,60 μmol/L 木犀草素作用 MCF-7 细胞

48 h 后,其迁移率降低了 (71.07 ± 2.9)% (P <

0.01).结 果显示木犀草素显著抑制乳腺癌 MCF-7 细胞的侵 袭性. 表1. 木犀草素对MCF-7细胞生长的抑制作用 Table 1. Inhibitory effects of luteolin on proliferation of MCF-7 cells Groups Control

20 μmol/L luteolin

40 μmol/L luteolin

60 μmol/L luteolin

24 h

0 (6.21 ± 1.63)% (22.63 ± 2.87)% (30.25 ± 1.37)% *