PDF《第7卷第 1期》

第7卷第

1 期1992年3月 中罾府毒学VI ROLOGI CA SI NI CA .

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1 脊髓灰质炎病毒

2 A蛋 白在 重组病毒 中的功能研 究 李琦 涵 戴长柏 袁天喜 胡凝 株苏晔郭仁.堡至焦 陶 应双 ( 中 田医学 科学院 医学生 物 学研究所 .昆明6 ^ o

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7 ) '

2 z 提耍应用所构建的不同脊蕾 灰质受病毒一 痘苗病毒(下 简称PV― VV ) 重 组体 探 讨脊 t 灰质 炎病毒(下 简称PV)2 A蛋 白在重 组 病毒 中的作用 .所得到的 四个 以不同PV基因片段插入痘 苗病毒(下简 称VV )TK区而 形成的重组 病毒 均有PV抗 婊的表达,并可诱导 { 亢体产生,但 此表选水平明显 受蓟2 A蛋 白的影 响.同时 , 重组病毒 对不同细 胞的适应性 亦有变化.对 此 ,本 文进行了 初步 的 探讨 . 关蕾 词 :重 组病毒脊髓藏 质炎 病毒2 A蛋白痘苗病 毒 一怒.高,脊髓灰质嶷病毒非结 构蛋 白成分之一 .

2 A , 是一 种在P V 复制增殖过程 中具有特定作 用的蛋 白酶 类…. 随着P V 分子 生物学研究 的 日益深入 ,巳成为研 究P V复制及细 胞感染过 程 中的 一个重要问题 . 实验 证实 ,

2 A蛋 白可 以导致 P2

2 0成分―― 即真核细 胞翻译 起始因 子4F的一 个组 成部分―― 的裂解,而 中止 宿主 细胞 的太分子 合成 ¨ . 同时还具有特 定 的蛋 白酶解 作用,可裂解 Y ―G肽键,而 此作用有助于 P V 完成毒粒 的组装过程 】 . 另外,2 A产 物还 具有对重组病毒的特 殊作用 . 因此, 继续探讨

2 A蛋 自的 作用 具有理论 和实用意义. 本文利 用所 构建的不同特点 的P V ― VV重组体 ,探讨2 A蛋 白在重组病毒中 的功 能, 以深入对2 A蛋白的认 识,为重 组病毒 疫 苗的发 展提供 必要 的资料. 材料和方法

一、质粒的构造 p S ~ '

2 0 2:该质 粒古有PV 1型M8 h

0 n . y 株的 全序列,如 图l. p J

1 2 0(中国预防医氍院病毒所惠赠): 该质 粒含VV (TT 株)P1

1 、P

0 5 双启动子一带 Lt c 标记基西如图l按圜l所 示分{ j l i 组建PR一1 ;

p R一2;

p R一3;

pR-

4 质粒 .

二、PV- VV重组体曲体 内蛆人二倍体细胞KMB 一17株 ( P

2 8)一E a g l e 培养液中 (8和小 本文于 l 口01年1 月31日收 到,B 月4 日修 西'

中国预 防医学 科学 院 病毒学研 究所 .北京本项 工作 得到了张智 清 ,唐恩 华尉教授 爰林 机、阮永 良、陈元鼎 、李 光宇 石怀生 , 王两春 等厨意 的鼎 力帮助,在 此一并致 谢. 维普资讯 http://www.cqvip.com

4 4 中国病毒学第7卷牛血 清 )长 至单层,弃 培养液后以P BS 清洗细趋 , VV (TT林,按0.02PF U/ 细胞计)3

7 C 吸附细胞

3 0 mi n,加 入维 持液(2嘧小 牛血 请),3

7 C2 h,弃持液后用pR-

1 ;

l o B . 一2;

p R-

3 ;

p R- 4纯 化质 粒,(1

0 / * g)钙转化法 转化该细胞 ,

3 7 C

3 0mi l a j ~,加含3嘧小 牛血 请~jEagle液,3

7 C4

8 h ,待 细胞 完全病变后,收毒 球存. 图l脊髓藏 质毙一 痘 苗苴 组质粒 的掏建 l j该 质粒携 带 脊髓灰 质负 病毒全 基固 ;

b _携带 脊髓灰 质炎 病毒 V P I 和2A基因jc:无2 A的 脊髓 藏 质煦 病毒 全基因 ;

d :仅旮 脊髓灰 质炱 病毒 V P I 基因. Fi g.

1 T h e c o n s t r uct i o n o f Pol i o vi r u s ―Va c c i n i a r e c o m bi aa t e pl a s m i d whi c h c o nt ai n i ) '

Po l i D V i r u EI 口ttalg…;