PDF《PS W 22 W》

0 0m g / L和HN1

0 0m g / L , 作为对照品储备 液, 其它不同浓度的标准液经稀释得到;

内标物烟酰胺( N A )

6 0 0m g / L .上述样 品用缓冲液溶解并稀释 到刻度, 摇匀、 滤过, 待用.

2 .

3 实验方法 毛细管在使用前依次用

0 . 1m o l / LN a O H 、 蒸馏水、

0 . 1m o l / LH C l 、 蒸馏水、 缓冲液冲洗约 5m i n, 以 保证毛细管电泳图的重现.压力进样, 时间 6s .分离电压

2 3k V ,毛细管工作温度:

2 2±

10 C , 测定波 第33卷

2 0

0 5年 2月 分析化学 ( F E N X I H U A X U E ) 研究简报 C h i n e s eJ o u r n a l o f A n a l y t i c a l C h e m i s t r y 第 2期

2 3 3~

2 3

6 P S

2 2 P D F ( T r i a l V e r s i o n ) W W W . C C Y T . N E T 长:

2 6 4± 2n m .数据采集与分析用美国贝克曼公司随机所带软件进行处理.

3 结果与讨论

3 .

1 缓冲溶液离子浓度及电压对毛细管电泳分离的影响 在毛细管电泳中, 缓冲溶液组分、 离子浓度、 电压等对电渗流( E O F ) 速度、 样品的分离影响较大.本 实验分别选用硼砂、 柠檬酸、 碳酸钠及磷酸盐等多种试剂配成不同组分、 不同 浓度的缓冲液, 调节电压

1 5~

2 5k V , 分离样 品.从峰型好、 峰 高随 样 品浓 度变化灵敏、 样品分析周 期短等方面 考虑, 选用25m m o l / L 磷酸二氢钾 -磷酸氢二钠缓冲体系、 分离电压

2 3k V .

3 .

2 p H值对毛细管电泳分离的影响 背景电解质 p H可以改变熔硅毛细管表面特性, 对EOF产生影响.p H高, 毛细管表面负电荷密度 大, E O F速度快.反之, E O F速度慢.p H不仅影响 E O F亦影响样品的电泳行为.H N和NIC是两性化 合物, 以pH4 . 8~

8 . 0的25m m o l / L磷酸二氢钾 - 磷酸氢二钠为运行缓冲液, 均能达到基线分离.从图 1看出: p H高时, 噪音、 背景吸收较大, 两峰迁移时间差小;

p H为5.3~

5 .

6 , 背 景吸收小, 峰型尖锐;

p H 在此范围内样品的峰高、 峰面积随浓度变化灵敏;

p H4 . 8时, N I C拖尾明显, 迁移时间长.故实验选用 p H5 . 3的缓冲液.在上述选定条件下, 用NA作内标, 迁移时间位于 H N与NIC之间, 对分离不干扰. N A价格低廉, 易得. H N 、 N A和NIC3种 物质同一个母体, 仅是酰胺基N上的取代R不同: R H( N A );

R C H 2C H 2O H( H N ) ;

R C H 2C H 2O N O 2( N I C ) .吡啶环上的氮原子, 在 酸性环境中接受质子的 能力较强, 成为荷正电粒子.这 3种物质由于荷电能力, 粒子大小不一, 在电场中迁移速度不同, 而获得 分离( 见图

2 ) . 图1pH对分离的影响 F i g .

1 T h ee l e c t r o p h e r o g r a m a t d i f f e r e n t p H N - (

2 -h y d r o x y e t h y l ) n i a c i n a mi d e( N H ) :2

2 .

6 8m g / L ;

n i c o r a n d i l ( N I C ) :

1 3

6 .

5 m g / L ;

缓冲液(b u f f e rs o l u t i o n ) :

2 5 m o l / L K H 2P O 4- N a 2H P O 4;

进样时间(injectiontime):6s;

电压(voltage):2

3 . 0k V . 图2HN、NIC标准电泳图谱 F i g .

2 T h ee l e c t r o p h o e r o g r a m o f s t a n d a r dr e a g e n t 缓冲 液( b u f f e r s o l u t i o n ) :2 5mm o l / LK H 2P O 4-N a 2H P O 4,p H=

5 .

3 ;

进 样时间 ( i n j e c t i o nt i m e ) :6s ;

电压( v o l t a g e ) :2

3 . 0k V .

3 .

3 线性范围、 溶液稳定性和迁移时间重现性 用NIC和含 H N的NIC储备液配置成系列浓度, 以本法测定, 对照品溶液浓度 Y与峰面积比值 F呈 良好的线性关系, N I C和HN的回归方程分别为: Y=