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6 ( 3T

3 , . 与HSV-2相应段的同源 与HSV-2相应段的同源性为

1 8 /

1 8 .上述寡棱奇酸用 B i o - s y s t c r ~8

1 A型DNA合成仪合成.

5 P C R反应曩结果 判定PCR反 应所用

0 .

5 m l 微 量离心管 、 试荆及 热循 环仪为 P c ~ k J n - ~ I I T J g T C c t u s 产品 .反应 物包含 :

1 0 X缓 冲液

5 . z l (

5 0 mn ~l / LKC I _ ~

1 0 n ~ . o

1 / LT d s - H C ! , p H

8 .

3 }

1 .

5 r n mo l / LMg C

1 D .

1 0 r ~ n o

1 / L的dATP、dCIP、 d G T P 、 d r i p各l.2~nol,L的左 、 右侧 弓f物各 l . 处理过的待检标本

4 , T a g D N A聚台酶

0 .

2 5 . Ⅱ ( I .

2 5 u ) , 用无菌去离子水补到

5 , 再加灭菌石腊油

4 0 扩增程序为

9 5 C1 分钟 .

5 2 C1 分钟 ,

7 2 C1 分钟 , 共进 行36个循环.自第

3 1 . 个循环开始 . 每个循环的

7 2 C延仲时间递增

3 8 . 最后―个循环延伸时间为

8 分钟 . 取扩 增产物 I O l l l , 与溴酚兰 电泳上样泣

4 混匀后作琼脂糖微量 电诛.腔浓度为

3 . 电泳缓冲液为 I XT A E泣.

1 0

0 V,

2 b 后取下胶块 , 用澳化乙锭 ( 髓)染色 l

0 分钟在紫外灯下观察 D N A区带的有无 , 并根据区带与 D N A标准marker的位置关 系.估算扩增 产物 的碱 基数 .

6 E L I S A检测 I B M抗体 以舢的抗入 I 臣 链抗体包被反应板 ,

4 C 过夜 . 洗涤

3 *3 分钟.加入 l l

1 0

0 稀释的检测血清 .

3 7 C作用 l h . 洗涤

3 *1 分钟. 加入

1 ―

5 0 稀释的H S V抗原 ,

3 7 C 作用 l h , 洗涤

3 *3 分钟 , 加入1―

2 0

0 0 稀释的辣根过氧化物酶标记的抗 H S V单克隆抗体 .

3 7 C 作用 l h . 洗涤

3 X3 分钟 .加入 O P D底物 , ℃避光作用

1 5 分钟.以≥2 .

0 者判为阳性. 结果1胎盘屏障 作用完好条件下 的羊 水污染 P C R检测 拈对引产孕妇 宫颈分 秘物和注射器 抽 取羊水 中的 H S V核酸 ;

9 份宫颈 标本 为阳性 , 阳性 率为

1 8 .

8 i 一份羊水标本 为阳性 , 阳性 率为2.1.xz=7 .

1 4 , P .

0 5 , 无显著性 差异. d 孕产妇生育髓 次与 HS V感染 的关系 P C R检测宫颈 标本的结 果表 明・孕产 妇头 胎妊娠和 多胎 妊娠时 , 宫颈标本 H S V核酸阳性 率分 别为 l

7 .

9 (

1 0 / '

5 6 ) 及22.7(10/44).=0 .

3 6

5 ・ P >

.

0 5 , 无显著性 差异.

5 孕 产妇 H S V原发 性感染 和继发性感染羊水污染率的比较 对PCR检测结果 阳性 的20名 孕 产妇 , 用ELISA法测定 其血 中抗 H S V的IgM抗体 .获 阳性结果者

3 人・表明其为原发性感 染.获阴性 结果者

1 7 人.表明其为继发性感染 . 比较其与对应羊水的检测结果可知 : 孕 产妇 原 发性感染和继发性感 染的羊水污染率分别 为66.7(2/3)及29.4(5/17).维普资讯 http://www.cqvip.com

3 d

6 中国病毒学第8卷讨论关于母体 妊娠期 问存 在的活动性生殖道 H S V感染可 垂直感 染子代的 问题 已受 到有关专 家 的极大关注[

3 ] . H S V多侵染暴露的体表 , 有时不进人体液 循环与机体的免疫系统广泛接触 产 生特异性抗体 , 本研 究有

6 份 羊水受 H S V污染 , 但 出生一个月仅 有d例婴儿查 到HSV―IgM, 另 2倒没查到 H S V― I g M 可 能就是缘于此 因. 在没有 出现特征性病 损之前 , 很难选定子代适 当的部 位进行取样 , 以确定其是 否受到 H S V垂直感染 . 鉴于子代 与羊 水的密切关 系,本研究通过检测 羊 水调查子代被垂 直感染 H S V情况 , 并通 过产后随防测定子代 的HSV―IgM, 证 实羊 水受 污染 的子代有较高 H S V感染率 , 其中通过感染产遭受感染 的机率大 于宫内感染 的机率 (