PDF《石岩 1,耿颖 1,郑天骄 1,》

pig bile powder;

bile acid;

glycohyodeoxycholic acid;

glycochenodeoxycholic acid;

HPLC;

ELSD;

Hierarchical clustering analysis;

principle component analysis 法) [17-18] 、 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法 (MALDI-TOF-MS 法) [19-21] 、 液相色谱 - 质谱法 (LC- MS 法) [22-25] 以及柱前衍生化 HPLC 法[26-29] .由于 胆汁酸类成分缺少共轭结构, 因此紫外吸收极弱, 不 经衍生化的情况下, HPLC-UV 法只能使用末端吸 收, 才能对其进行检测, 灵敏度与准确度均不理想. 目前, 胆汁酸类成分的测定手段多为 HPLC-ELSD 法及LC-MS 法.HPLC-ELSD 法的检测成本较低, 测 定的灵敏度不高, 而LC-MS 法测定灵敏度较好, 更适 合测定样品中的微量成分, 其仪器的维护和测定成本 很高.由于本文主旨是对猪胆粉中的主要胆汁酸类 成分进行测定研究, 所以选用了较低成本的 HPLC- ELSD 法, 其较低的成本以及较易维护的特点也更利 于方法的推广使用. 全轮廓色谱数据研究是以连续的色谱数据点为 研究变量, 相较于以已积分的色谱峰或已测定的成分 含量为研究对象的方式而言, 具有更加全面、 客观等 优点, 不仅可有效避免微小色谱信息的遗漏, 也可避 免积分误差引起的错误结论, 而且对色谱峰的完全分 离要求不高.本文在完成

22 批不同来源的猪胆粉样 品中主要胆汁酸类成分的测定研究之外, 还尝试运用 系统聚类分析和主成分分析这

2 个最常用的化学计 量学方法对所测样品的 HPLC-ELSD 全轮廓图谱进 行分析研究, 藉此为猪胆粉药材的质量评价与控制提 供技术参考.

1 仪器与试药 1.1 仪器 Waters

2695 高效液相色谱仪 (Waters, 美国) ;

Alltech 2000ES 蒸发光散射检测器 (Alltech, 美国) . Agilent SB-C18 色谱柱 (4.6 mm*250 mm,

5 μm;

填料: 十八烷基键合硅胶;

Agilent, 美国) .数据处理 使用 Empower

3 网络版液相色谱工作站 (Waters, 美 猪胆是一种重要的动物来源的中药材, 中国自古 就将其作为药用, 首载于 《名医别录》 , 距今已有千余 年药用历史. 《本草纲目》 中描述猪胆为 苦、 寒、 无毒 , 用于治疗 赤白痢、 小便不通、 消渴无度、 目翳、 目 赤肿痛、 疔疮恶肿、 风闭塞 等病症, 称 方家用猪胆, 取其寒能胜热, 滑能润燥, 苦能入心, 又能去肝胆之火 也 .猪胆的传统制法是将猪宰杀后, 剖腹将胆囊取 出, 胆汁鲜用或将胆囊挂起晾干.现代常将猪的胆汁 滤过, 干燥, 粉碎制得猪胆粉, 具有清热润燥、 止咳平 喘、 解毒的功效, 主要用于顿咳、 哮喘、 热病燥渴、 目赤、 喉痹、 黄疸、 泄泻、 痢疾、 便秘、 痈疮肿毒的治疗[1-2] . 猪胆粉中主要含有胆汁酸、 胆色素、 蛋白和脂 等类成分.其中胆汁酸类成分是其主要成分, 主要 有猪胆酸、 猪去氧胆酸、 鹅去氧胆酸、 牛磺猪去氧胆 酸(taurohyodeoxycholic acid, THDCA) 、 牛磺鹅去氧胆酸、 甘氨猪去氧胆酸(glycohyodeoxycholic acid, GHDCA)和甘氨鹅去氧胆酸 (glycochenodeoxycholic acid, GCDCA) [2-6] .胆汁酸类成分不仅是猪胆粉中 的主要成分, 也是其主要的活性成分, 因此常通过对 该类成分的定性和定量分析来达到对猪胆粉药材的 质量评价与控制的目的.中国药典

2015 年版一部[1] 仅对其中的 THDCA 进行了含量控制, 然而从本文研 究发现, 猪胆粉中的甘氨结合型胆汁酸含量最高, 而GHDCA 和GCDCA 是其含量最高的