PDF《石岩 1,耿颖 1,郑天骄 1,》

2 个胆汁酸类成 分, 这2种胆汁酸含量之和约为 40% 以上. 胆汁酸类成分的测定方法主要有薄层扫描法 (TLCS 法) [7] 、 高效液相色谱 - 紫外检测法 (HPLC- UV 法) [8] 、 高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD 法) [9-11] 、 气相色谱法 (GC 法) [12] 、 氢核 磁共振法 (1 H NMR 法) [13-14] 、 胶束电动毛细管电泳法 (MEKCE 法) [15] 、 高速逆流层析与蒸发光散射联用法 (HSCCC-ELSD 法) [16] 、 气相色谱 - 质谱法 (GC-MS ・285・ 国)和Matlab 2009a 数学软件(Mathworks, 美国) . Mettler AE240 电子天平 (Mettler-Toledo, 瑞士) ;

KQ- 300DA 型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限 公司, 中国) . 1.2 试药 乙腈为色谱级, 水为 Milli-Q 超纯水, 甲酸为质 谱级, 其他试剂均为分析纯. GHDCA (批号 24-CF-57-3) 来自加拿大 TRC 公司, 甘氨鹅去氧胆酸钠 (GCDCA-Na, 批号 081M5209V) 来自 美国 SIGMA 公司;

两者纯度均大于 98%. 测定样品为

22 批猪胆粉样品, 其中序号为 1~16 的样品 (编号 ZD1~ZD16)为自制样品 (将鲜猪胆 汁过滤, 冷冻干燥后制得) , 序号为

17 的样品 (编号 ZD-STD) 为猪胆粉对照药材 (批号 121273-201101, 中国食品药品检定研究院) , 序号为 18~22 的样品 (编号 ZD-S-1~ZD-S-5) 为市售样品.

2 主要胆汁酸类成分的测定 2.1 供试品溶液的制备 取样品粉末约

25 mg, 精密称定, 置具塞三角瓶中, 精密加入甲醇

50 mL, 称量, 超声 (功率

300 W, 频率

40 kHz) 处理

20 min, 甲醇补足减失的量, 过滤, 即得. 2.2 对照品溶液的制备 精密称取 GHDCA 对照品适量, 加甲醇配成每

1 mL 含GHDCA 为0.810 mg 的对照品母液, 以及每

1 mL 含GHDCA 分别为0.

091、 0.

162、 0.

230、 0.

253、 0.276 mg 的系列对照品溶液. 取GCDCA-Na 对照品适量, 精密称定, 加甲醇制成每

1 mL 含GCDCA-Na 为0.400 mg 的对照品母液以及 每1mL 含GCDCA-Na 分别为0.

040、 0.

080、 0.

120、 0.

160、 0.200 mg 的系列对照品溶液. 2.3 色谱条件 采用 Agilent SB-C18 色谱柱 (4.6 mm*250 mm,

5 μm) , 柱温

40 ℃, 流动相为 0.2% 甲酸水溶液 (A) - 乙腈 (B) , 梯度洗脱 (0~20 min, 25%B → 55%B;

20~

21 min, 55%B → 25%B) ,流速1.0 mL・min-1 ;

ELSD 漂移管温度

110 ℃, 氮气流量 2.8 L・h-1 , 增益为 1;

进 样量

10 μL. 在上述色谱条件下, 对照品溶液和供试品溶液色 谱图见图 1. 2.4 方法学考察 2.4.1 线性关系考察 精密吸取系列对照品溶液各

10 μL 进样, 测定并记录各对照品溶液色谱图中色谱 图1对照品及样品的色谱图 Fig.

1 HPLC chromatograms of reference substances and samples 峰峰面积, 以对照品进样量 (μg)的对数值为横 坐标, 对应的色谱峰峰面积的对数值为纵坐标, 绘制GHDCA 和GCDCA-Na 的标准曲线.GHDCA 和・286・ GCDCA-Na 质量浓度分别在0.091~0.276 mg・mL-1 和0.040~0.200 mg・mL-1 范围内线性关系良好, 回归 方程及相关系数分别为 Y=1.440 5X+6.036

8 r2 =0.999

2 Y=1.596 3X+5.982

3 r2 =0.999

9 2.4.2 精密度试验 取ZD2 样品的供试品溶液连续进 样6次, 记录待测成分色谱峰峰面积, 计算 GHDCA 和GCDCA-Na 峰面积的 RSD 分别为 0.4% 和1.1%. 2.4.3 重复性试验 取ZD2 样品, 平行制备供试品溶 液6份, 分别进样, 测定 ZD2 猪胆粉样品中 GHDCA 和GCDCA (由GCDCA-Na 换算可得) 的平均含量分 别为 32.2% 和18.4%, RSD 分别为 1.3% 和1.6%. 2.4.4 回收率试验 取ZD2 样品