PDF《Rb 和P21 基因在婴幼儿皮肤血管瘤中的表达 及意义》

0.05) , and which was significantly higher than that in vascular malformation ( P <

0.001) .Conclusions It is suggested that Rb / P21 might play an important role in the regression of hemangiomas endothelial cells. 【Key word】 Skin neoplasms/PA;

Hemangioma/PA;

Genes, Suppressor, Tumor;

Oncogene Protein p21 ( ras) ・ 论著 ・

33 ・ ・ 临床小儿外科杂志

2008 年8月第

7 卷第

4 期Journal of Clincical Pediatric Surgery, August 2008, Vol.7, No.4 域标本, 另取瘤体周围正常皮肤

10 例作为对照组.

二、 实验方法 1.常规 HE 染色 采用免疫组 织化学法 ( SP 法) 检测 Rb、 P

21、 PCNA 和CD34 相关抗原. 主要步骤: 取4μm 组织切 片, 常规脱蜡. Rb、 P21 和PCNA 采用高压抗原修复, CD34 相关抗原采用胃酶消化修复抗原, 3% 过氧化 氢处理

10 min, 正常二抗动物血清处理

15 min, 一抗 4℃孵育过夜, 生物素标记的二抗处理

10 min, 链霉 菌抗生物素蛋白 - 过氧化物酶复合物处理 l5 min, DAB 显色液显色, 自来水冲洗, 苏木精复染.脱水, 透明, 封片, 用小细胞肺癌组织切片作为染色阳性 对照标准, 用PBS 代替一抗作为阴性对照标准, 人 正常皮肤表皮作为 PCNA 的阳性对照组. 2.结果判断 以血管瘤的血管内皮细胞膜、 胞浆或胞核染色 呈黄色至棕黄色, 为Rb、 P21WAF1/CIP1 的阳性反应, 以 细胞核出现棕黄色颗粒为 PCNA 阳性反应, 以胞膜 和胞浆出现棕黄色颗粒为 CD34 相关抗原阳性反应. 参照卢晓晔等[4] 的方法, 根据国际免疫组织化学技 术与诊断标准[5] , 凋亡细胞的原位检测以细胞核着 色呈黄色为凋亡阳性细胞. 凋亡指数 ( AI) = [染色阳 性细胞数(10 个高倍视野中) / 计数细胞总数(100*10) ]*100%. 3.统计学处理 应用 SPSS( 12.0 版) 软件, 凋亡指数均值采用 χ±S 表示, 统计学分析采用 t 检验, P <

0.01 为差 异有显著统计学意义.其他数据进行 χ

2 检验, 检验 水准 α= 0.05, P <

0.05为差异有统计学意义. 结果

一、 HE 染色结果 A 组见大量增生活跃的内皮细胞, 形成细胞团 状或细胞索状, 肥大细胞数目明显增多, 管腔少或 形成裂隙, 基底膜多层;

B 组见血管内皮细胞明显减 少, 形成大量的毛细血管管腔, 血管外已无内皮细 胞团或细胞索, 血管间结缔组织明显增多, 血管间 距增大;

C 组见瘤体由密集排列、 异常扩张的血管组 成, 血管内皮细胞呈单层扁平状排列, 管腔大小不 等, 血管周围有结缔组织包绕.

二、 PCNA 的表达情况 A 组PCNA 强阳性表达的内皮细胞围成血管 腔, 呈团块状, 核椭圆, 体积较大 ( 图1) .B 组PCNA 呈弱阳性表达, 血管内皮细胞明显减少, 形成大量 毛细血管腔 ( 图2) .C 组PCNA 呈阴性表达, 毛细血 管腔被大量脂肪组织和纤维组织压缩变窄 ( 图3) . A 组与 B 组和 C 组比较, 差异有统计学意义 ( P <

0.05)( 表1) .

三、 血管瘤内皮细胞凋亡情况 A 组血管瘤内皮细胞增生活跃, 形成内皮细胞 团, 血管呈丛状或小叶状分布, TUNEL 法染色后见 少量散在分布的凋亡细胞 ( 图4) .B 组瘤组织内细 胞成分减少, 见散在呈岛状分布的脂肪和纤维组 织, 可见大量细胞凋亡 ( 图5) .C 组管腔部位被大量 脂肪和纤维组织取代, 管腔被压缩变窄, 此期几乎 无细胞凋亡 ( 图6) .A 组凋亡指数均值为 2.268± 0.714, B 组凋亡指数均值为 23.697±11.765, C 组凋 亡指数均值为 1.346±0.583.B 组与 A 组及 C 组比 较, 差异有显著统计学意义 ( P <