PDF《产品信息》

1 产品信息 Thermo Scientific Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒(适用于 RT-qPCR) #K1641,#K1642 www.

thermoscientific.com/onebio

2 分析证书 经验证,在两步法 RT-qPCR 中,对于不同起始量(5 ng-0.5 fg)的RNA 逆转录产物, 使用 Thermo Scientific Maxima SYBR Green/ROX qPCR 预混液进行 qPCR 扩增.其反应效 率在 90-110%之间,曲线斜率在-3.09 和-3.58 之间,且相关系数>0.99. 质量授权人: Jurgita Zilinskiene

3 目录 页码 试剂盒组分.4 贮存条件.4 产品描述.4 重要提示.5 RT-qPCR 实验方案

6 对照反应.6 疑难解答.7 参考文献.8

4 试剂盒组分 Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒 (适用于 RT-qPCR) #K1641

50 次#K1642

200 次Maxima Enzyme Mix

100 μl

400 μl 5*反应混合液

200 μl

800 μl 无核酸酶的水 1.25 ml 4*1.25 ml 贮存条件 所有试剂盒成分都应贮存于-20 ° C. 产品描述 Thermo Scientific Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒是合成 cDNA 第一链的方便系统, 适用于两步法实时定量 RT-PCR(RT-qPCR)中的 cDNA 合成.试剂盒采用先进的 Maxima 反转录酶(RT) ,该酶源自 M-MuL V 逆转录酶的体外进化.这种酶相比 M-MuL V 逆转录 酶热稳定性高,扩增效果强劲且具有更高的 cDNA 合成效率. Maxima 第一链 cDNA 合成 试剂盒能够在较高温度下 (55-65℃) , 在很宽的总 RNA量范围内 (从1 pg到5μg) 合成 cDNA. 合成反应能在 15-30 分钟内完成. Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒的各组分经预混合,以节约时间和减少移液错误.试 剂盒由 Maxima Enzyme Mix、5*反应混合液、无核酸酶的水三部分组成. Maxima Enzyme Mix 包含 Maxima 反转录酶和 Thermo Scientific Ribolock RNase 抑制 剂.重组的 Ribolock RNase 抑制剂能有效保护 RNA 模板在高于 55℃时不被 RNase A、B 和C降解. 5*反应混合液包含剩余的反应组分:反应缓冲液、dNTPs、Oligo(dT)18 和随机引物. 无核酸酶的水用于反应体系的配制和 RNA 样本的溶解.已通过相关检验证明其中不含 脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶、核糖核酸酶和磷酸酶.

5 重要提示 避免核糖核酸酶污染 RNA 的纯度和完整性对于合成全长 cDNA 至为重要. RNA 能够被 RNase A 降解,而在 任何实验环境中都能发现这种稳定的污染物. 本试剂盒中所有成分都经过严格检测, 确保其 不含 RNase.为了避免污染,实验环境以及所准备的试剂溶液都必须不含 RNase. 避免 RNase 污染的一般建议: ? 使用确保无核酸酶的实验器具,或者用 DEPC 水处理 cDNA 合成中所用到的反应 管和枪头等. ? 整个实验过程中请戴手套,因为皮肤是 RNA 酶的一个常见来源.同时实验过程中 注意经常更换手套. ? 使用无核酸酶的试剂,包括高纯度的水(如无核酸酶的水,#R0581) . ? 未使用试剂盒时请严格密封保存.在反转录过程中,所有反应管要确保扣严. 模板 RNA 通过标准方法分离的总细胞 RNA 适用于该试剂盒.纯化的 RNA 需确保不含盐分、金 属离子、乙醇和苯酚,以防其抑制 cDNA 合成反应. 对于 RT-PCR,模板 RNA 需确保没有 DNA 污染.在cDNA 合成之前,可先用无核酸酶 的DNase I(#EN0521)去除痕量 DNA. 实验中需要逆转录酶负对照反应.该反应含有除 Maxima Enzyme Mix 以外的所有其他 RT 反应组分. RNA 样本质量 在合成 cDNA 之前需对 RNA 的完整性进行评估.真核生物总 RNA 能够通过琼脂糖凝 胶电泳后进行 EB 染色来分析检测.如果总 RNA 电泳后有 18S 和28S rRNA 的锐利条带, 可认为 RNA 是完整的.28S RNA 条带的亮度大约为 18S rRNA 条带的两倍.rRNA 条带出 现任何拖尾现象都表示 mRNA 存在降解.如果这种情况发生,需重新制备总 RNA 样品.另外,也可用生物分析仪器(如Agilent 2100)分析总 RNA,该仪器能对 RNA 样本的大致状 况,RNA 的完整数(RIN) (2)进行定量.内参基因/目的基因 3':5'完整性分析(3)也能 用于检测 RNA 样本的完整性. 引物 Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒包含 Oligo(dT)18 引物和随机引物,以引导第一链 cDNA 的合成.该引物混合物可确保检测低拷贝转录物时的高灵敏性.