PDF《DB33》

6 样品制备与保存 6.1 样品制备 取有代表性的禽肉,水产品约

500 g,肌肉样品要剔骨去皮,切成不大于 0.5cm*0.5cm *0.5cm 的小块,用组织捣碎机绞碎,混匀,装入洁净容器, 密闭,标明标记. 取代表性的蜂产品样品约 500g,对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀;

对有结晶析出的 蜂蜜样品,在密闭情况下,将样品瓶置于不超过 60℃的水浴中温热,振荡,待样品全部融 化后搅匀,迅速冷却至室温,在融化时必须注意防止水分挥发.装入洁净容器,密封,标明 标记. 6.2 试样保存 禽肉,水产品等试样于-18℃以下冷冻保存.蜂蜜常温下保存备用. 在制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.

7 分析步骤 7.1 提取 称取样品 10g(精确至 0.01g), 置于 100mL 离心管(5.10),加入 2.0g 氯化钠(4.1) 和2.0g 磷酸氢二钾(4.2),混匀,加入 20.0mL 乙酸乙酯(4.3),40℃振荡提取 60min, DB33/T 693―2008

5 4000r/min 离心 5min, 上清液经过无水硫酸钠 (4.4) 滤入 100mL 浓缩瓶, 在残渣中加入 20.0mL 乙酸乙酯(4.3),重复提取一次,合并滤液. 7.2 净化 将提取液于 40℃以下在旋转浓缩至近干.用1.0mL 盐酸溶液(4.14 )和1.5mL 乙酸乙酯 (4.3)溶解残渣,溶液转移到 10mL 的离心管中,重复操作一次,溶解残渣,合并溶液转 移到离心管.加入 5.0mL 正己烷(4.6),涡旋振荡萃取脱脂,弃去上层正己烷层,重复萃 取一次,收集合并下层液. 预先用 2.0mL 甲醇(4.7),2.0mL 水活化固相色谱小柱(4.20),将提取净化液上柱, 控制流速在 1.0mL/min,加3.0mL 水洗柱,抽干,加3.5mL 氨水甲醇溶液(4.15)洗脱,收 集洗脱液,40℃水浴氮气吹至约 0.5mL,用流动相定容至 1.0mL,经0.45μm 微孔滤膜过滤, 滤液供液相色谱测定. 7.3 测定 7.3.1 色谱条件 a)色谱柱:C18 柱250mm*4.6mm(i.d.) ,5μm 或同类型号色谱柱;

b)柱温:30℃;

c)流动相:乙酸缓冲液(4.13)+乙腈=86+14,V/V;

d)流速:1.0mL/min;

e)进样量:30μL;

f)检测器波长:320nm. 7.3.2 色谱测定 分别取 30μL 进样,以峰面积为纵坐标,以标准样品中各种硝基咪唑含量为横坐标, 绘制工作曲线.对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定. 7.4 空白试验 除不加试样外,按上述测定步骤进行.

8 结果计算和表述 按(1)式计算试样中各种硝基咪唑药物的残留含量:

1000 m V Ci Xi * * 1) 式中:Xi――试样中各种硝基咪唑的含量,单位为毫克每千克(?g/kg);

Ci――试样溶液中各种硝基咪唑的含量,单位为微克每毫升(μg/mL);

V――试样最终定容体积,单位为毫升(mL);

m――试样质量,单位为克(g). 注:计算结果应扣除空白值.测定结果用平行测定的算术平均值表示.

9 方法检测限和回收率 9.1 检测限 本方法甲硝唑、洛硝哒唑、地美硝唑、替硝唑、奥硝唑的检测限均为2μg/kg. 9.2 回收率 本方法在不同的样品基质中甲硝唑、地美硝唑、奥硝唑、替硝唑、洛硝哒唑添加浓度及 回收率的实验数据见附录 B 表B.1. DB33/T 693―2008

6 附录 A (资料性附录) 硝基咪唑类药物的色谱标准图 图A.1 五种硝基咪唑类药物的标准品色谱图 1. 甲硝唑(5.8min) 2. 洛硝哒唑(6.7min) 3. 地美硝唑(9.1min) 4. 替硝唑(10.5min) 5. 奥硝唑(15.7min) 图A.2 五种硝基咪唑类药物的在空白大黄鱼加标色谱图

1 甲硝唑(5.8min) 2. 洛硝哒唑(6.7min) 3. 地美硝唑(9.1min) 4. 替硝唑(10.5min) 5. 奥硝唑(15.7min) min

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