PDF《鳖甲药材指纹图谱与其抗肝纤维化作用的谱效关系研究=》

国家自然科学基金资助项目(UNMTPMSV)= 作者简介:肖云芝,女,硕士研究生,研究方向为中药新制剂、新剂型、新技术研究.qelW=EMNMFSSVPPPST= = bJmailW=destineyT]NSPKcom= *通信作者 袁海龙,男,博士,研究员,博士生导师,研究方向为中药新型给药系统.qelW=EMNMFSSVPPPST= = bJmailW=yhlpharm]NOSKcom= 韩= = 晋,女,主任药师,博士生导师,研究方向为中药剂型与工程技术研究.qelW=EMNMFSSVPPOOR= = bJmailW=hanjinPMOemba]NSPKcom 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第45 卷第17 期2014 年9月・2507・ 中药药效是多个有效成分的协同作用.中药指纹图 谱能够标示中药中的多种化学成分,但其反映的化 学信息可能并不包含中药的有效成分,与中药疗效 的相关性不强.因此,将指纹图谱与中药药效评价 相结合, 通过指纹图谱与其药效作用的相关性研究, 不仅能使指纹图谱中化学成分体现相应的药效,也 能阐明指纹图谱特征与药效的关系,确定相应的药 效物质基础,从而运用构建的药效指纹图谱更有针 对性地控制中药质量[4-7] . 本研究测定了

12 个产地鳖甲药材的 HPLC 指 纹图谱及其抗纤维化作用,利用 SPSS 19.0 软件进 行分析,建立了鳖甲药材的谱效关系,为鳖甲药材 的控制建立有效的方法,同时为鳖甲药材的临床应 用提供基础.

1 仪器与材料 BSA―124S 型精密电子天平, 赛多利斯科学仪 器有限公司;

LC―20AT 型岛津高效液相色谱仪, 含在线脱气机,四元梯度泵,自动进样器,DAD 检 测器,日本岛津公司;

MYB 型电子调温电热套, 天津市中环实验电炉有限公司;

RE52 型旋转蒸发 仪, 上海亚荣生化仪器厂;

XDS―1B 倒置生物显微 镜,北京京瑞天下科技有限公司;

Multiskan GO 全 波长酶标仪,Thermo Scientific. 所购买鳖甲药材经解放军三二医院袁海龙研 究员鉴定为鳖科鳖属动物鳖Trionyx sinensis Wiegmann 的背甲,产地见表 1.LX-2 肝星状细胞, 北京协和细胞资源中心;

尿苷(批号 YY10961) 、 鸟苷(批号 YY10964) ,上海源叶生物科技有限公 司.色谱甲醇,重蒸水,其余试剂均为分析纯. 表1不同产地鳖甲药材样品来源 Table

1 Trionycis Carapax samples from different regions 编号 采集地点 编号 采集地点 编号 采集地点 S1 江西九江 S5 浙江嘉兴 S9 湖北黄陂 S2 安徽安庆 S6 浙江吴兴 S10 湖北监利 S3 安徽芜湖 S7 河南商城 S11 湖南常德 S4 浙江金华 S8 湖北孝感 S12 湖南邵阳

2 方法与结果 2.1 HPLC 测定鳖甲药材指纹图谱方法建立 2.1.1 色谱条件 色谱柱为 Arcus EP C18 柱(250 mm*4.6 mm,5 μm) ;

流动相为水-甲醇,梯度洗 脱程序:0~35 min,88%水;

35~45 min,88%~ 80%水;

45~70 min,80%水;

体积流量为 0.8 mL/min;

室温, 检测波长为

254 nm, 进样量为

20 μL. 2.1.2 对照品溶液制备 分别精密称取尿苷、鸟苷 对照品适量置于

25 mL 量瓶中,用甲醇配制成含尿 苷36.68 μg/mL、鸟苷 27.2 μg/mL 的混合对照品溶 液,备用. 2.1.3 供试品溶液制备 将12 批鳖甲药材于

40 ℃ 干燥

30 min,经粉碎后,分别过

80 目筛,精密称 取约 5.0 g,加75%乙醇

50 mL,回流提取 1.5 h,滤过,残渣加 75%乙醇

50 mL 继续回流 1.5 h,合并

2 次滤液,减压浓缩至约

20 mL,加水至 80%,冷处 放置

24 h,滤除沉淀,滤液经减压浓缩至

25 mL, 取续滤液,用0.22 μm 微孔滤膜滤过,即得.部分 冷冻干燥,供抗肝纤维化实验. 2.1.4 鳖甲药材指纹图谱的建立 采用中药色谱指 纹图谱相似度评价软件 2004A 版,对各产地