PDF《ICS 11.020》

10 min;

2) 漂洗:用pH 7.2 的PBS 漂洗

3 次,每次

1 min;

3) 干燥:37 ℃或自然干燥;

4) 染色:双份标本分别滴加异硫氰酸标记的 HSV

1 和HSV

2 单克隆抗体工作液,置37 ℃湿 盒中,结合

30 min~1 h;

5) 漂洗:用pH 7.2 的PBS 漂洗

3 次,每次

5 min;

6) 干燥:37 ℃或自然干燥;

7) 封片:用封片液(由90%甘油和 10%的PBS 组成)1 滴封片;

8) 结果观察:在荧光显微镜下(紫外线波长

495 nm)观察记录,结果记录方法如下: ? -为无荧光;

? ±为极弱可疑荧光;

? +为荧光较弱,但清晰可见;

? ++为荧光明亮;

? +++~++++为荧光闪亮,且范围广泛. B.1.3 结果 检测结果如下: a) HSV 引起的 CPE 具有一定的特征性, 典型的 CPE 表现为初始时细胞浆颗粒增粗, 细胞变大变圆, 继而细胞肿胀,气球样变,可见融合细胞或多核巨细胞. b) 应用单克隆抗体免疫荧光试验鉴定和分型时,阳性细胞的细胞浆和细胞核内可见亮绿色荧光, 而阴性细胞则复染成橙红或暗红色,无亮绿色荧光. c) 出现典型 CPE 时初步表明病毒培养阳性. 当用免疫学方法或分子生物学方法鉴定证实后, 可报 告为 HSV 培养阳性 ,同时报告相应的 HSV 型别. B.1.4 注意事项 注意事项如下: a) 标本取材后应尽快接种,不能于

24 h 内接种的标本应在-70 ℃冻存. b) 标本接种时,注意无菌操作,避免细菌和真菌污染.所有待检标本均应保留部分标本,以便在 培养污染或操作失误时重复实验. c) CPE 出现的时间:50%以上的阳性标本 CPE 出现在接种后

24 h~48 h,80%~90%的CPE 出现 在接种后的

3 d~4 d, 95%以上在

7 d 内出现 CPE, 仅有 5%左右的........