PDF《ICS 11.120》

60 F254 或硅胶 G 薄层板. A.2.1.7 甲醇. A.2.1.8 三氯甲烷. A.2.1.9 水. A.2.1.10 浓硫酸. A.2.1.11 乙醇. A.2.1.14 羟基积雪草苷、积雪草苷对照品. A.2.2 鉴别方法 A.2.2.1 样品溶液 取本品粉末 250mg,置25mL 容量瓶中,加入约 20mL 甲醇超声处理 30min,用甲醇定容至刻度,滤过. A.2.2.2 对照品溶液 取羟基积雪草苷、积雪草苷对照品 2.0mg,溶解于 2mL 甲醇中. A.2.2.3 色谱操作 分吸取对照品溶液和供试品溶液各 5?L, 分别点于同一 TLC Silica gel

60 F254 板上, 以三氯甲烷 - 甲醇 - 水(7:3:0.5,v/v/v)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10% 硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰. A.2.2.4 比移值 Rf 的计算 比移值 Rf 按式(A.1)计算: (A.1) 式中:L1 -- 原点到样品(或标准品)色斑中心的距离,cm;

L0 -- 原点到展开剂前沿的距离,cm. 计算结果保留小数点后一位有效数字. A.3 积雪草总苷的测定 A3.1 试剂 A3.1.1 乙腈(色谱纯). A3.1.2 甲醇. A3.1.3 磷酸. 附录A(规范性附录) 检验方法 T/CCCMHPIE 1.9―2016 %

100 W

1 2

2 ? ? m m 式中: m1――过筛前的样品重量,g. m2――过筛后接收盒内的样品重量,g. ? ? ? ? ? ? ? ? %

100 m c

509 .

0 526 .

0 017 .

1 Wi i i ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? A P V D C B A

7 A3.1.4 β 环糊精. A3.1.5 2mmol/Lβ 环糊精(pH=4):称取 2.27g β 环糊精,加水 1000mL 超声溶解,用磷酸调节 pH 至4(约 加磷酸 0.1mL),超声混匀,过0.45μm 水系滤膜. A3.2 对照品 积雪草苷对照品单体. 积雪草提取物定性对照品(供总苷含量测定时定性用,含羟基积雪草苷、积雪草苷、羟基积雪草酸、 积雪草酸

4 种成分) A3.3 仪器和用具 A3.3.1 高效液相色谱仪(紫外检测器或二极管阵列检测器) A3.3.2 分析天平:感量 0.01mg. A3.3.3 超声波清洗器. A3.3.4 针筒式过滤器,0.45μm 微孔滤膜(有机系). A3.4 色谱条件 A3.4.1 色谱柱:Luna C18,250 mm *4.6 mm,5μm. 流动相: a)流动相 A:2 mmol/Lβ 环糊精(pH=4)(A.2.1.5) b)流动相 B:乙腈 A3.4.2 梯度条件:见表 A.1 表A.1 梯度条件 时间 /min 流动相 A(%,v/v) B(%,v/v)

0 24

76 20

24 76

60 45

55 76

24 76 A3.4.3 柱温:25℃. A3.4.4 流速:0.8mL/min . A3.4.5 检测波长:205nm. A3.4.6 进样量:10μL. A3.5 操作步骤 A3.5.1 积雪草苷对照品溶液的制备:精密称取积雪草苷适量,用甲醇超声溶解,配制成浓度约为 1.0mg/ mL 的标准使用溶液,过0.45μm 有机滤膜,备用. A3.5.2 定性对照品溶液的制备:精密称取积雪草提取物定性对照品适量, 用甲醇超声溶解, 定容, 过0.45μm 有机滤膜,备用. A3.5.3 样品溶液的制备:取本品粉末约 250mg, 精密称定, 置25mL 容量瓶中, 加甲醇超声处理, 冷却至室温, 甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得. A3.5.4 依次注射空白溶液、对照品溶液、定性对照品溶液、样品溶液进行检测,外标法定量. A3.6 计算 总皂苷含量以质量分数 Wi 计,数值以 % 表示,按式 (A.2) 计算: ………(A.2) T/CCCMHPIE 1.9―2016 %

100 W

1 2

2 ? ? m m ? ? ? ? ? ? ? ? %

100 m c

509 .

0 526 .

0 017 .

1 Wi i i ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? A P V D C B A

8 式中: A――样品中积雪草苷的峰面积;

B――样品中羟基积雪草苷的峰面积;

C――样品中羟基积雪草酸的峰面积;

D――样品中积雪草酸的峰面积;

ci――积雪草苷对照品的浓度,mg/mL;

V――样品的定容体积,mL;

P――积雪草苷对照品的纯度,%;

Ai――积雪草苷对照品的峰面积;